Le transporteur mitochondrial d'ADP/ATP (ANC2) de saccharomyces cerevisiae. Elaboration et caractérisation de formes colorées par voie chimique ou par fusion génique, en vue d'approches cristallographiques

par Emmanuel Dassa

Thèse de doctorat en Biochimie

Sous la direction de Gérard Brandolin.

Soutenue en 2004

à l'Université Joseph Fourier (Grenoble) .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Le transporteur mitochondrial d'adénine nucleotides est une protéine membranaire qui catalyse l'échange d'ADP cytoplasmique contre l'ATP néo-synthétisé dans la matrice. Le travail présenté dans ce mémoire porte sur la coloration du transporteur Anc2p de Saccharomyces cerevisiae pour faciliter sa cristallisation dans une phase cubique de lipide. Le premier volet présente une approche de coloration chimique basée sur l'emploi de réactifs des thiols. Le second volet expose une stratégie de coloration par fusion génique du transporteur avec le cytochrome c de S. Cerevisiae. Les protéines de fusion obtenues Anc2-Cycl (His6)p et Cycl-Anc (His6)p, sont focntionnelles et leurs caractéristiques ont été étudiées de manière détaillée. La protéine Anc2-Cycl (His6)p a été purifiée à homogénéité pour entreprndre les essais de cristallisation.


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  • Titre traduit

    ˜Theœsaccharomyces cerevisiae ADP/ATP mitochondrial carrier (ANC2). Elaboration and characterization of forms colored chemically or genetically, in order to develop a structural approach.


  • Résumé

    The mitochondrial adenine nucleotide carrier is a membrane protein which catalyses the exchange of cytoplasmic ADP against ATP synthésized in the matrix. The present work concerns the coloration of the Anc2p carrier from Saccharomyces cerevisiae with the aim at facilitating its crystallization in lipidic cubic phase. The first part presents results from a chemical coloration approach based on the use of thiol reactive compounds. The second part reports on coloration of carrier following a gene fusion strategy. We elaborated two chimera proteins, namely Anc2-Cycl (His6)p and Cycl-Anc2 (His6)p, in which the S. Cerevisiae cytochrome c was fused to the carrier. Both fusion proteins are functional and have been characterized in detail. Anc2-Cycl (His6)p has been purified to homogeneity to undertake cristallization trials.

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Informations

  • Détails : 161p.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p.143-156

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  • Bibliothèque : Service interétablissements de Documentation (Saint-Martin d'Hères, Isère). Bibliothèque universitaire de Sciences.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : TS04/GRE1/0051
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  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TS04/GRE1/0051/D
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