Elaboration de vecteurs ciblant sélectivement les différents domaines extracellulaires du VEGF-R2 et validation dans différents modèles d'angiogenèse

par Marc Trombe

Thèse de doctorat en Physiopathologie

Sous la direction de Jean Plouët.

Soutenue en 2003

à Toulouse 3 .


  • Résumé

    L'angiogenèse est un processus qui permet le développement de nouveaux vaisseaux à partir de la circulation préexistante. Elle peut être pathologique et permettre le développement tumoral. Le VEGF active le VEGF-R2 ce qui conduit à la prolifération, la migration des cellules endotheliales et la formation de nouveaux vaisseaux. Le VEGF induit la dimérisation, la phosphorylation du VEGF-R2 et l'internalisation du VEGF avec le VEGF-R2 dans les cellules endothéliales. Le VEGF-R2 est composé de 7 domaines " immunoglobuline-like ", les domaines 1 à 3 sont responsables de la liaison au VEGF et le rôle des domaines 4 à 7 reste peu connu. Nous avons produit des anticorps monoclonaux anti-idiotypiques du VEGF. L'anticorps A9, agoniste du VEGF-R1 stimule l'haptotaxie des cellules endothéliales sans avoir aucun effet sur la croissance tumorale in vivo. L'anticorps monoclonal A12, agoniste du VEGF-R2 induit la phosphorylation du VEGF-R2, l'activation des MAP kinase et l'internalisation du VEGF-R2. A12 stimule la croissance tumorale in vivo. Ces anticorps sont de nouveaux vecteurs pour l'étude des fonctions spécifiques du VEGF-R1 et du VEGF-R2. Leur utilisation in vivo peut permettre de cibler l'endothélium angiogénique et d'internaliser des drogues dans les cellules endothéliales. Nous avons produit et purifié le domaine 4 à 7 du VEGF-R2 (VEGF-R2 4-7). Le VEGF-R2 4-7 inhibe l'haptotaxie et la différenciation des cellules endothéliales sans avoir d'effet sur la prolifération cellulaire induite par le VEGF. Le VEGF-R2 4-7 interagit directement avec l'intégrine αVβ3, le VEGF 189, PlGF2 et semble interagir avec la VE-Cadhérine. In vivo, la sécrétion VEGF-R2 4-7 par les tumeurs ou son injection systémique réduit le poids et le volume tumoral. Le domaine 4-7 du VEGF-R2 module l'activité du VEGF-R2 en interagissant directement avec des co-récepteurs du VEGF-R2 et des protéines séquestrées dans la matrice au cours de l'angiogenèse.

  • Titre traduit

    Vectors elaboration targeting selectively the extracellular VEGF-R2 domains and validation in angiogenesis


  • Résumé

    Angiogenesis is a complex process resulting in the formation of new blood vessels from the existing vasculature. Pathological angiogenesis is responsible of tumour development. VEGF-R2 stimulation by VEGF is a critical pathway involved in angiogenesis resulting in endothelial cells proliferation, migration and new blood vessels formation. VEGF trigger VEGF-R2 dimerisation, transphosphorylation and the internalisation of the complex VEGF-VEGF-R2. VEGF-R2 has seven immunoglobulin-like extracellular domains, the domains 1 to 3 are responsible for VEGF binding and the functions of the 4 to 7 domain remain unclear. We have produced monoclonal anti-idiotypic antibodies agonist of VEGF receptors. A9 antibody, agonist of VEGF-R1 stimulates endothelial cell migration in a haptotactic assay without having any effect on in vivo tumour development. A12 antibody, agonist of VEGF-R2 stimulates VEGF-R2 phosphorylation, MAP kinase activation and VEGF-R2 internalisation. A12 stimulates tumour growth in vivo. These antibodies are new vectors which could help to elucidate VEGF receptor independent pathways and implications in angiogenesis. These antibodies could be used as vectors to target and internalised drugs in endothelial cells during pathological angiogenesis. We have produced and purified a recombinant protein containing the 4-7 extracellular domain of VEGF-R2. This domain inhibits VEGF induced migration and differentiation of endothelial cells without having any activity on VEGF induced proliferation. This domain binds the αVβ3 integrin, the VEGF 189 and the PlGF2 and might bind the VE-Cadherin. In vivo, the secretion of this protein or the intra peritouneous administration inhibits tumour weight and tumour size in mice. Our conclusions are the domain four to seven of VEGF-R2 modulates VEGF-R2 activities by interacting with VEGF-R2 co-receptor and bound proteins within the matrix during angiogenesis.

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Informations

  • Détails : 1 vol. ( 186 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p. 168-183

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  • Bibliothèque : Université Paul Sabatier. Bibliothèque universitaire de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 2003TOU30240
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