Etude de glutathiones S-transférases par spectrométrie de masse : séquences et interactions non covalentes

par Julie Hardouin

Thèse de doctorat en Sciences physiques. Spectrochimie

Sous la direction de Catherine Lange.

Soutenue en 2003

à Rouen .


  • Résumé

    L'apparition des ionisations MALDI et ESI a permis à la spectrométrie de masse de devenir la technique de choix dans l'analyse protéomique et pour l'étude des complexes non-covalents. L'objectif de cette étude était de caractériser, par spectrométrie de masse, les structures primaire et quaternaire des glutathiones S-transférases (GST) ainsi que son interaction avec des toxines afin d'expliciter un processus de détoxication. Dans un premier temps, nous avons déterminé les séquences de GST porcines ainsi que certaines modifications post-traductionnelles par MALDI-TOF-MS et LC-ESI-IT/MS. Dans un deuxième temps, nous avons étudié les complexes non-covalents des GST porcine et humaine, sous ionisation ESI sur un appareil à secteurs. Les interactions de faible énergie entre l'enzyme dimérique, le glutathion (GSH) et un cyclodepsipeptide, la DTXE (toxine fongique) ont été mises en évidence. L'observation de ces complexes non-covalents exige l'optimisation de la préparation de l'échantillon et le réglage des paramètres source ESI. Cette étude met en relief la capacité de la spectrométrie de masse à effectuer des " screening " de ligands, de substrats et d'inhibiteurs d'une protéine. Cette approche ouvre une voie ultérieure sur le devenir des substrats c'est-à-dire de métabolisation, établissant ainsi un lien entre le protéome et le métabolome.

  • Titre traduit

    Study on glutathiones S-transferases with mass spectrometry : non-covalent interactions and sequences


  • Résumé

    Mass spectrometry coupled with the ionizations MALDI or ESI is the analytical technique in proteomic and for the study of non-covalent complexes. The goal of this work is to characterize the primary and quaternary structures of glutathiones S-transferases (GST) with mass spectrometry. Their interactions with toxins is studied to explain the detoxication processes. First, the sequences of porcine GST and post-translational modifications were determined by MALDI-TOF-MS and LC-ESI-IT/MS. Secondly, the non-covalent complexes of porcine and human GST were studied by ESI on a magnetic analyzer. The non-covalent interactions between the dimeric enzyme, the glutathion (GSH) and a cyclodepsipeptide (DTXE) were analyzed. The observation of these species needed the optimization of the sample preparation and the source parameters. This study showed the high efficiency of mass spectrometry to perform screenings of ligands, substrates and inhibitors of proteins. This approach opens up for the future studies of drugs and their metabolites linked with enzymes. The proteome has a direct link with the metabolome.

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Informations

  • Détails : 233 p.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. 330 réf.

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  • Bibliothèque : Université de Rouen. Service commun de la documentation. Section sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 03/ROUE/S031
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