Synthèse de copolymères à blocs amphiphiles via le procédé RAFT, utilisables comme support de synthèse oligonucléotidique : applications à des tests de diagnostic sur puces à ADN

par Bertrand de Lambert Breghot du Lut

Thèse de doctorat en Chimie macromoléculaire

Sous la direction de Christian Pichot.

Soutenue en 2003

à Lyon 1 .


  • Résumé

    Les tests diagnostiques de type ELOSA permettent la détection 'in vitro' de séquences spécifiques d'acides nucléiques (cible d'ADN) présentes dans un milieu biologique. L'utilisation de polymères porteurs de sondes nucléiques (ODN) favorise la capture de la cible d'ADN et son immobilisation sur un support solide, d'où une meilleure sensibilité des tests. Ainsi, L'objectif de ce travail de thèse a consisté à synthétiser un copolymère à blocs amphiphile dans le but d'élaborer une nouvelle architecture de conjugués (polymère-ODN), pouvant s'immobiliser de manière orientée sur un support solide via le bloc hydrophobe de la chaîne polymère. La polymérisation radicalaire contrôlée de type RAFT du N-tert-butylacrylamide (TBAm), monomère hydrophobe, a été effectuée en examinant l'influence de différents paramètres expérimentaux. Le caractère contrôlée de cette polymérisation a été confirmé avec des masses molaires obtenues par CES/DDL proches des valeurs théoriques, des Ip étroits (Ip<1,1) et une très bonne fonctionnalité des bouts de chaîne étudiée par MALDI-TOF MS. A partir des chaînes de poly(TBAm), la synthèse de copolymères à blocs amphiphiles et réactifs a été réalisée en utilisant les monomère N-acryloylmorpholine (NAM) et N-acryloxysuccinimide (NAS). Les conjugués (polymère-ODN) ont été élaborés par synthèse directe des ODN sur le copolymère à blocs préalablement greffé sur un support de silice à porosité contrôlée (CPG) (les fonctions NAS ayant permis le couplage des amorces de synthèse des ODN sur le bloc hydrophile). Les conjugués obtenus ont été purifiés et analysés en CES, puis étudiés en test ELOSA sur un modèle dT25 et sur des modèles de génotypage, dans un format de puce à ADN de basse densité (puce commercialisée par la société Apibio). Les résultats ont mis en évidence l'intérêt de l'utilisation des polymères, avec une amplication du signal de détection, une sensibilité et une gamme dynamique améliorées, ainsi qu'une spécificité des tests à un mismatch près


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Informations

  • Détails : 295 p.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 133 réf. bibliogr.

Où se trouve cette thèse\u00a0?

  • Bibliothèque : Université Claude Bernard (Villeurbanne, Rhône). Service commun de la documentation. BU Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : T50/210/2003/154bis

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  • Bibliothèque : Université de Lille. Service commun de la documentation. Bibliothèque universitaire de Sciences Humaines et Sociales.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : 2003LYO10219
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