Modifications de la surface de la [béta]-galactosidase de Kluyveromyces lactis : effets sur la stabilisation thermique

par Josue Raymundo Solis Pacheco

Thèse de doctorat en Biologie - Santé. Biotechnologie

Sous la direction de Didier Combes.

Soutenue en 2003

à Toulouse, INSA .


  • Résumé

    L'effet de la modification de la surface de la b-galactosidase et sur sa stabilité thermique a été étudié. Deux types de molécules ont été utilisées pour la modification : la dextrane qui a un caractère nettement hydrophile et le polyéthylène glycol qui est un polymère amphiphile. La liaison covalente de la dextrane a été effectué grâce à l'aide du CNBr. Alors que la molécule de PEG a été fixé covalente à l'enzyme en utilisant du metoxypolyéthylène glycol activé avec s-chlorotriazine. Les propriétés de la b-galactosidase ainsi modifiées ont été étudiées. Des variations de la charge et du caractère hydrophobe de la surface consécutives aux modifications ont été observées par chromatographie. Des propriétés des enzymes modifiées par rapport à sa stabilité à été observée grâce à la détermination de d'effet protecteur et de la dénaturation par calorimétrie différentielle à balayage. Nous avons pu montrer que la liaison de la dextrane induit une faible augmentation de l'hydrophilie de la surface de l'enzyme, ainsi qu'une augmentation de sa stabilité thermique en milieu aqueux. La dérivatisation réalisée avec du PEG (bas niveau) donne lieu à un accroissement du caractère hydrophobe de la b-galactosidase. Toutefois une diminution très prononcée de l'activité de la b-galactosidase a pu être observée après ces modifications. La dénaturation de la b-galactosidase a été étudie en présence d'additifs tels comme la dextrane et le polyéthylène glycol, dans sa forme libre à plusieurs concentrations. Dans le deux cas se montre un effet protecteur par rapport à l'enzyme native sans additifs

  • Titre traduit

    Modifications of surface of beta-galactosidase Kluyveromyces lactis : effect on the thermal stabilisation


  • Résumé

    Two types of molecules were used for the chemical modification of th beta-galactosidase : The dextran that has a hydrophile character and the glycol polyethylene that is an amphiphile polymer. The property of the modified beta-galactosidase were studied. The variations such that the hydrodynamics volume, the charge and the hydrophobe character of the surface ; also variations of catalytic parameters of the enzyme and his thermal stability. Property of modified enzymes in comparison with his stability to been observed thanks to the determination the protective effect and deactivation by differential determination scanning. We were able to show that the liaison of the dextran induces an increase of his thermal stability in aqueous environment. The realized modification with PEG (low level) give place to increase of the hydrophobe character of the beta-galactosidase. Nevertheless a very pronounced decrease of the activity of the beta-galactosidase could be observed after these modifications

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Informations

  • Détails : 117 p.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p. 102-118

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  • Bibliothèque : Institut national des sciences appliquées. Bibliothèque centrale.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 2003/690/SOL
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