Etude de l'expression d'un gène codant une aquaporine tonoplastique de chou-fleur chez le tabac : analyse de la dynamique vacuolaire et de l'effet de stress osmotiques

par Daniel Reisen

Thèse de doctorat en Biologie moléculaire et cellulaire végétale

Sous la direction de Francis Marty et de Nathalie Leborgne.

Soutenue en 2003

à Dijon .


  • Résumé

    Des gènes chimères codant l'aquaporine tonoplastique de chou-fleur BobTIP26-1 ont été réalisés pour étudier son rôle dans des systèmes hétérologues végétaux en conditions de cultures normales et de stress osmotiques. Le gène codant la protéine verte fluorescente GFP a été fusionné en 3' de l'ADNc BobTIP26-1. L'expression fonctionnelle dans des ovocytes de xénope montre que BobTIP26-1 ::GFP facilite la perméabilité à l'eau de la membrane plasmique de l'ovocyte. En expression transitoire dans des protoplastes de cellules de tabac, la protéine BobTIP26-1 ::GFP n'est pas adressée au tonoplaste, mais reste bloquée dans le système sécrétoire. BobTIP26-1 ::GFP décore le tonoplaste des cellules de tabac en suspension Wisconsin 38 et des plants de tabac Xanthi transformés de façon stable. L'analyse morphométrique démontre que l'expression de BobTIP26-1 ::GFP s'accompagne d'un grandissement significatif des cellulaires. L'architecture tridimensionnelle de la vacuole de ces cellules a été reconstituée.

  • Titre traduit

    Study of a cauliflower tonoplast gene expression in tobacco : analysis of vacuolar dynamics and the effect of osmotic stresses


  • Résumé

    Chimeric genes encoding the cauliflower tonoplast aquaporin BobTIP26-1 were constructed in order to study its role in plant heterologuous systems in normal culture conditions and during osmotic stresses. The gene encoding the green fluorescent protein GFP was fused downstream to the BobTIP26-1cDNA. Functionnal expression into Xenopus oocytes showed that BobTIP26-1 ::GFP allows oocyte plasmamembrane water permeation. BobTIP26-1 ::GFP is not targeted to the tonoplast in transiently expressed tobacco protoplasts, but stuck in the secretory pathway. Tonoplast is however decorated by BobTIP26-1 ::GFP in stable transformed tobacco cv. Wisconsin 38 suspension cells and tobacco cv. Xanthi plants. Morphometric analyses of these cells showed an increase in cell volume triggered by the fusion protein allowing vacuolar volume increase. Three-dimensional recontructions from the vacuole of these cells were achieved and vacuolar membrane dynamics during plamolyses-deplasmolyses cycles are presented.

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Informations

  • Détails : xv-180 p.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p. 151-165, [245] réf.

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  • Bibliothèque : Université de Bourgogne. Service commun de la documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TDDIJON/2003/32

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