Mise en évidence d'une activité silencer du LCR de la globine β et caractérisation d'une nouvelle activité anti-silencing du site hypersensible HS4

par Renaud Warin

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire et moléculaire

Sous la direction de Eric E. Bouhassira et de Jacques Rochette.

Soutenue en 2003

à Amiens .

mots clés

• Région de contrôle de locus
• Globines
• Transgènes
• Expression des gènes
• Génétique
• Génétique moléculaire

Résumé

Le locus de la globine β est un modèle classique pour l'étude de la régulation transcriptionnelle. Dans cette thèse, différentes activités de régulation liées au Locus Control Region (LCR) humain de la globine β ont été mises en évidence à l'aide de la méthode Recombinase Mediated Cassette Exchange (RMCE), qui permet d'effectuer des intégrations chromosomales site-spécifique. L'observation des profils d'expression de nombreuses cassettes -contenant différentes variations du LCR ou des sites hypersensibles HS- nous a permis de mettre en évidence une activité "silencer" dépendante de la chromatine pour les sites HS2 et HS3, alors que HS4 est capable de ralentir l'extinction des transgènes. Ces activités sont dépendantes de l'établissement d'interactions entre le LCR et des séquences du site d'intégration. Nous proposons un nouveau modèle d'extinction des trangènes, et nous discutons de son application potentielle dans le design de trangènes et dans la régulation des gènes de globine β

Titre traduit

Description of a novel silencer activity of the β globin LCR and characterization of a new anti-silencing activity of hypersensitive site HS4

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Résumé

The β-globin locus is a widely-used model for transcriptional regulation studies. In this PhD report, we describe new regulatory activities that lies within the human Locus Control Region (LCR) using Recombinase Mediated Cassette Exchange (RMCE), a method to perform site-specific chromosomal integration. The studies of expression patterns of cassettes containing several combinations of the DNAseI hypersensible sites HS reveal that a new chromatin-dependant silencer activity lies within sites HS2 and HS3, and that HS4 is able to slow down silencing. Establishment of interactions between the LCR and sequences close to the integration site are necessary for those activities to occur. We propose a novel model to explain transgene silencing, and we discuss the potential applications for transgenes design and regulation of the β-globin genes during development