Cinétique de la réaction d'hydrolyse du hyaluronane catalysée par la hyaluronidase testiculaire bovine : Transposition à une hyaluronidase extraite de tumeurs cancéreuses humaines

par Trias Asteriou

Thèse de doctorat en [Biochimie]. Polymères fonctionnels

Sous la direction de Jean-Claude Vincent.

Soutenue en 2002

à Rouen .


  • Résumé

    Le hyaluronane (HA) est un polysaccharide anionique linéaire constitué de motifs disaccharidiques (N-acétyl-D-glucosamine-b(1,3)-acide-D-glucuronique) liés en b(1,4). In vivo, son catabolisme est assuré par une famille d'enzymes, les hyaluronidases (HAase). Les HAase de type testiculaire hydrolysent les liens b(1,4). La réaction d'hydrolyse du HA catalysée par la HAase testiculaire et les paramètres qui la régulent n'ont été que peu étudiés. Par ailleurs, cette réaction semble impliquée dans le développement tumoral. Le présent manuscrit constitue une étude approfondie du mode de fonctionnement du système HA/HAase testiculaire bovine, en fonction des concentrations en enzyme et en substrat, de la force ionique et du pH. La principale méthode utilisée pour suivre les cinétiques d'hydrolyse (méthode de Reissig), permet de doser les extrémités réductrices N-acétylglucosamine (GlcNAc) formées lors de l'hydrolyse. Le signal mesuré par cette méthode n'étant pas uniquement dû aux extrémités GlcNAc formées, nous avons proposé une amélioration qui consiste à extraire mathématiquement un signal de turbidité non-spécifique, du signal dû aux extrémités GlcNAc. La modélisation des cinétiques par la somme de deux exponentielles nous a permis de proposer un mode d'action de l'enzyme. D'autres méthodes (chromatographie d'exclusion stérique, viscosimétrie, zymographie) ont été utilisées afin de caractériser le système HA/HAase. Parmi elles, la viscosimétrie a permis de mettre en évidence l'effet de la viscosité sur la réaction. En effet, l'étude de l'influence des concentrations en HA et en HAase, du pH et de la force ionique sur la vitesse d'hydrolyse indique que la réaction est essentiellement contrôlée par des phénomènes de diffusion des molécules, liés à la viscosité des solutions apportée par le HA, induisant une non-linéarité du système. La dernière partie du manuscrit est une transposition de ces résultats, à l'étude d'une HAase extraite de tumeurs humaines.


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Informations

  • Détails : 189 f.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. 237 réf.

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  • Bibliothèque : Université de Rouen. Service commun de la documentation. Section sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 02/ROUE/S005
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