Clonage moléculaire et caractérisation du gène humain codant l'Uridine diphospho-glucose deshydrogènase (UGDH)

par Yannick Bontemps

Thèse de doctorat en Médecine. Biochimie et biologie moléculaire

Sous la direction de Yanusz Wegrowski.

Soutenue en 2002

à Reims .


  • Résumé

    L' @Uridine diphospho-glucose (UGDH) régule l'expression des glycosaminoglycannes en fournissant l'UDP-glucuronate nécessaire à leur synthèse. Nous avons cloné l'ADN complémentaire de ce gène chez l'homme par RT-PCR, montré que ce gène était exprimé de façon ubiquitaire et que son expression pouvait être modulée par le TGF-b ou l'hypoxie. Ensuite, nous avons cloné les 11 introns présents sur l'ADN génomique et déterminé le site d'initiation de la transcription. Enfin, le clonage de la partie 5'-flanquante au site d'initiation de la transcription a été cloné. Les études de transfection transitoires dans différents types cellulaires ont permis de mettre en évidence la fonctionnalité du promoteur ainsi que certaines régions régulatrices responsables du taux de transcription en réponse aux stimuli étudiés. Les études de retard sur gel, couplées aux études réalisées en présence de WP631 (inhibiteur de Sp1) tendent à prouver que le facteur de transcription Sp1 est un régulateur universel de L'UGDH


  • Pas de résumé disponible.

  • Titre traduit

    Molecular cloning and characterization of the Human gene coding Uridine diphospho-glucose dehydrogenase (UGDH)


  • Résumé

    @UDP-glucose dehydrogenase (UGDH) is a unique pathway enzyme, which furnishes in vertebrates the UDP-glucuronic acid. Using a reverse-transcription-polymerase chain reaction approach, human ant murin UGDH was cloned from fibroblasts mRNA. The gene is expressed in all murin tissue studied and in all cell culture too. Using long and accurate PCR approach, we have cloned the human UGDH. The gene contains 12 exons and spans over 26 kb. Primer extension analysis identified the transcription start site 165 bases upstream from the translation initiation site. Next, we have cloned and characterized the promoter. The minimal promoter contains a functional inverted TATA box. TGF-b or hypoxia regulates the expression of UGDH. The core promoter contained numerous GC-rich sequences for binding of Sp1 transcription factor. Gel shift assay and bisantrhracyclin (an anti-Sp1 compound) indicate that Sp1 sequences of UGDH core promoter are responsible for regulation of UGDH activity

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Informations

  • Détails : 221f.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. f.198-221

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