Régulation de l'expression du gène de l'IFN-γ dans le trophectoderme porcin : mise au point et étude d'un sytème cellulaire inductible in vitro

par Paulo Marcelo

Thèse de doctorat en Biologie

Sous la direction de François Lefèvre.

Soutenue en 2002

à Paris 11 .


  • Résumé

    Une expression atypique, transitoire d'interferon-gamma (IFN-γ) a été décrite au cours du développement du trophectoderme porcin et pose de nombreuses questions sur les mécanismes d'induction de l'IFN-γ dans ce tissu. Afin d'étudier ces mécanismes, nous avons isolé un clone cellulaire: B4-3. Quand elles sont cultivées sur membrane microporeuse, ces cellules acquièrent un phénotype polarisé comme le montre l'augmentation de la résistance transépithéliale (RTE). Elles sécrètent spontanément et transitoirement une faible quantité d'IFN-γ dans le compartiment apical entre le 4ème et le 6ème jour de culture. Lorsque nous avons traité les cellules B4-3 avec le PMA, nous avons observé une chute brutale de la RTE et une augmentation de la perméabilité paracellulaire indiquant un relâchement des JS. Trois jours après le retrait du PMA, la RTE augmente pour retrouver peu à peu sa valeur initiale. Nous avons montré que cette augmentation était corrélée avec une expression de l'IFN-γ (5 à 10 fois supérieure que la sécrétion spontanée). C'est le premier exemple d'induction d'IFN-γ par des cellules épithéliales polarisées. Après traitement par le PMA, nous avons montré que l'utilisation des inhibiteurs de MEK induisait induit une remontée plus rapide de la RTE corrélée avec une expression et une sécrétion de l'IFN-γ plus précoce suggérant le rôle important de cette voie de transduction dans la régulation de l'expression de cette cytokine. Nous avons montré que le promoteur de l'IFN-γ dans les cellules B4-3 était déméthylé suggérant que la déméthylation est nécessaire mais pas suffisante pour l'expression du gène. Enfin, nous avons détecté pour la première fois le facteur T-bet, un nouveau facteur de transcription récemment découvert dans les lymphocytes Th1, in vivo dans le blastocyste porcin et in vitro dans les cellules B4-3. Ces résultats suggèrent donc un mécanisme de régulation du gène de l'IFN-γ différent dans les cellules trophoblastiques porcines.


  • Résumé

    An atypical, transient and developmentally regulated expression of interferon-gamma (IFN-γ) by pig embryo's trophectoderm raises interesting questions about the mechanisms of IFN-γ gene induction in this tissue. In order to study these mechanisms, we isolated a cloned cell line named B4-3. When these cells are grown on microporous membrane they differentiate into highly polarized cell monolayer as monitored by transepithelial resistance (TER) increase, is accompanied by a transient expression of IFN-γ in the apical compartment of the cell culture system within 4-6 days. When we treated B4-3 cells with PMA, we observed a dramatic decrease of the TER and a large increase of transcellular permeability indicating TJs slackening. Three days after PMA removal, TER reach initial values. We observed a close correlation between TER increase and a transient IFN-γ expression (5-10 fold higher than the spontaneous one). This is the first example of inducible expression of IFN-γ by a polarized epithelial cell. In B4-3 cells plated on filters, we observed that MEK/ERK pathway inhibition activated more rapidly TER rising correlated with IFN-γ mRNA and protein expression after PMA treatment suggesting a potent role of this transduction pathway in regulation of IFN-γ expression. We reported in B4-3 cells the IFN-γ gene promoter was hypomethylated, thus suggesting that hypomethylation may be necessary but not sufficient for gene expression. Then, we detected for the first time T-bet, a novel Th1-specific transcription factor recently described in T cells which controls IFN-γ gene transcription, in vivo in pig blastocyst and in vitro in B4-3 cells. These results suggest an additional mechanism of IFN-γ gene regulation in porcine trophoblastic cells.

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Informations

  • Détails : 221-XXVIII p.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p.I-XXVIII.

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  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : M/Wg ORSA(2002)30
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