Nouvelles méthodes de séparations chirale et non chirale des acides aminés non dérivés par chromatographie en phase liquide et couplage à différents modes de détection : dosage dans des matrices complexes

par Konstantinos Petritis

Thèse de doctorat en Chimie et physicochimie des composés d'intérêt biologique

Sous la direction de Michel Dreux.

Soutenue en 2002

à Orléans .

  • Titre traduit

    Novel liquid chromatographic methods for the chiral and non chiral separation of underivatized amino acids and coupling with different detection modes : quantification in complex matrices


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  • Résumé

    L'analyse qualitative et quantitative des acides aminés est très importante à cause du rôle biologique considérable des ces molécules. L'écrasante majorité des publications concernant leurs dosages par CPL utilise une étape de dérivation pré ou post séparation. L'absence de chromophore ou fluorophore dans la structure de ces molécules justifie cette étape qui conduit à une détection sensible par spectrométrie. L'alternative que nous proposons à ces méthodologies concerne l'analyse des acides aminés sans dérivation. Notre travail est divisé en trois parties qui développent la séparation, la détection et le dosage en milieu complexe de ces composés. Dans la première partie, de nouvelles méthodes chromatographiques sont proposées pour la séparation chirale et non chirale des acides aminés non dérivés. L'appariement d'ions lorsque les amino acides sont sous forme cationique apparaît indispensable pour analyser les plus hydrophiles d'entre eux. La chromatographie d'interactions hydrophiles apporte des sélectivités complémentaires et la possibilité d'analyse chirale. Dans la deuxième partie, sept modes différents de détection sont présentés et trois démontrent un intérêt particulier. Il s'agit du détecteur évaporatif à diffusion de la lumière (DEDL), de la chimiluminescence spécifique à l'azote et de la spectrométrie de masse (SM) avec source d'ionisation par electrospray (ESI). Ce dernier détecteur est particulièrement intéressant du fait de sa spécificité et de sa sensibilité en mode tandem. C'est ainsi qu'une analyse simultanée par CPL-ESI-SM tandem, de 76 amino acides non dérivés est maintenant possible en moins de 20 minutes. La dernière partie de ce travail présente le dosage d'acides aminés dans divers fluides biologiques (urine, plasma), dans des matrices agro-alimentaires (tabac, vin , lait, extraits végétaux) et dans des échantillons de météorites. Les méthodologies proposées démontrent ainsi leur intérêt et on peut penser qu'elles pourront concurrencer les méthodes actuelles d'analyse utilisant la dérivation.

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Informations

  • Détails : 269 p.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Notes bibliogr.

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  • Bibliothèque : Université d'Orléans. Service commun de la documentation.Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TS 19-2002-07
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