Etude du changement de couplage stoechiométrique de la forme rénale du cotransporteur Na+ et de HCO3- exprimé dans les ovocytes de Xenopus laevis

par Olivier Ducoudret

Thèse de doctorat en Sciences de la vie

Sous la direction de Philippe Poujeol.

Soutenue en 2002

à Nice .


  • Résumé

    Le rapport stoechiométrique (q) du flux de HCO3- par rapport au Na+ est de 3:1 in vivo mais seulement de 2:1 dans les ovocytes de Xénopus. Pour étudier les paramètres responsables du changement de q, le cotransporteur rkNBC a éte exprimé dans des ovocytes. Q a été déterminé à partir du potentiel de réversion du courant INBC mesuré sur des " patches " de membrane géants. Le tenidap à l'inverse du DIDS peut inhiber INBC de façon réversible avec moins d'activations de courants. Le DIDS active 2 types de conductances ovocytaires : une non spécifique laissant passer les cations monovalents de type SAC (stretch-activated channel) et une spécifique du sodium de type DINa (depolarisation-induced Na+ channel). Ces conductances sont sensibles de façon réversible à 1mM d'amiloride. Nos résultats confirment que dans les patches en conditions physiologiques, rkNBC fonctionne avec q=2:1. L'élévation de la température à 32ʿC ou de la [Ca2+]i à 0. 1æM laissent q invariable. Par contre, une [Ca2+]i de 0. 5æM, permet un q de 3:1. Ceci est confirmé par modification des gradients de Na+ et de HCO3-. Ces données indiquent que rkNBC peut opérer avec différents q en fonction de la [Ca2+]i.

  • Titre traduit

    Change of the coupling stoichiometry of the rat kidney Na+ et de HCO3- cotransporter (rkNBC) expressed in Xenopus laevis ovocytes


  • Résumé

    The stoichiometric ratio of HCO3- to Na+ flux may be either 3:1 in vivo or 2:1 when expressed in Xenopus laevis oocytes. To study which parameter might be responsible for the change, we expressed rkNBC in oocytes and determined q from reversal point of the cotransport current (INBC). Q was determined from the INBC reversal potential. Instead of using DIDS, we used DIDS which inhibit INBC reversibly and had less side effects. Our results confirmed that in patches bathed with near physiological solutions, rkNBC operates with q=2:1. Raising temperature from 22 to 32ʿC does not change q. Similarly, the elevation of [Ca2+]i to 0. 1æM does not affect q. However, when raising [Ca2+]i to 0. 5æM, q increases to 3:1. The latter value was also found when Na+ and HCO3- gradients were altered, provided [Ca2+]i was elevated. The data indicate that rkNBC can operate with different stoichiometric ratios and that changes in q are triggered by [Ca2+]i. The data also suggest that [Ca2+]i does not stimulate rkNBC directly but via intracellular regulatory proteins.

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  • Détails : 105 f.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. f. 80-105. Résumés en français et en anglais

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