Étude des mécanismes de l'inflammation au travers de manipulations génétiques de NFKB dans l'endothélium vasculaire de la souris

par Bruno Guilloteau

Thèse de doctorat en Sciences de la vie et de la santé. Immunologie

Sous la direction de George Kollias.

Soutenue en 2002

à Nantes .


  • Résumé

    L'endothélium vasculaire constitue une barrière anticoagulante et anti-inflammatoire qui peut toutefois créer un environnement inflammatoire en réponse à des stimuli pathophysiologiques tels que les endotoxines, les cytokines et les réactions immunitaires. L'activation des cellules endothéliales (CE) nécessite l'expression de novo de gène codants entre autre pour des molécules d'adhésions, des chémokines et des facteurs procoagulant. L'activation de la plus part de ces gènes est contrôlée par NFkB dont l'inhibition spécifique in vivo constituerait un intéressant moyen d'étude de son rôle lors de l'activation des CE. Nous avons donc créé des souris transgéniques Tie2 IkaBa afin d'exprimer une protéine mutée mIkBa (S32/36A) dans l'endothélium. Cependant, le caractère létal des souris RelA-/- et IKK2-/- nous a conduit à créer un transgène où l'expression de mIkBa est induite par le système de recombinaison Cre/loxP. . La recombinase Cre est connue pour exciser une séquence d'ADN située entre deux sites loxP. La fusion de cette enzyme à une forme mutée du récepteur à la progestérone humaine (PR) conduit à une recombinase Cre (CrePR) activable par le RU486 mais pas par la progestérone endogène. Les souris Tie2 CrePR générées peuvent être croisées avec une seconde lignée de souris transgénique pour mIkBa dont l'expression est bloquée par l'insertion d'une séquence loxP-STOP-loxP. L'excision de cette séquence et par, conséquent l'expression de mIkBa, peut être induite par l'administration de RU486 chez les souris doublement transgéniques. Un tel système inductible ne sera utilisé uniquement si on observe un caractère létal lors de la réactivation de mIkBa par une lignée "Cre-deleter". L'expression de la protéine mIkBa est observée spécifiquement après recombinaison dans tous les tissus vasculaires testés. Les souris transgéniques pour mIkBa présentent une inactivation de NFkB au sein des CE et présentent une hypersensibilité au TNF, laquelle aboutit à une mort par hémorragie.


  • Résumé

    Vascular endothelium is an anticoagulant and anti-inflammatory barrier that can modify its phenotype to evoke an inflammatory environment in response to pathophysiological stimuli such as endotoxin, cytokines, and immunological insults. Endothelial cell (EC) activation implicates de novo expression of genes such as those encoding adhesion molecules, chemokines and procoagulant factors. NFkB regulates the induction of most of these gene s and specific inhibition of this transcriptional factor in vivo would provide a useful approach for a study of its role in gene expression in EC during endothelial cell activation. We then have generated Tie2 IkBa transgenic mice to over-express a mutant mIkBa protein (Ser32/36 mutated) in the vascular endotheliurn. However, the lethal character observed in RelA and IKK2 knock-out mice led us to create an inducible expression system for mIkBa using the Cre/loxP recombination system. The Cre recombinase protein is known to excise DNA, which is flanked by loxP sequences. The fusion of this enzyme to a mutated ligand-binding domain of the human progesterone receptor (PR) results in a RU486-dependent Cre-recombinase Cre-PR, which is activated by RU486 but not by endogenous progesterone. Generated Tie2 CrePR transgenic mice will be crossed with a second mouse strain transgenic for mIkBa in which the expression is disrupted by the insertion of a loxP-flanked-S TOP sequence. The excision of the insertion can be induced by administration of RU486 to these double transgenic mice, therefore inducing activation of mIkBa. This inducible system will be used if any lethal character is observed during reactivation of mIkBa by using a Cre deleter. The expression of the mIkBa protein is observed specifically after Cre-mediated recombination in all vascular tissues tested. Transgenic mice for mIkBa show an Endothelial cell-specific inactivation of NFkB and present a hypersensitivity to TNF, which leads to hemorrhage-mediated death.

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Informations

  • Détails : 157 f.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. f. 130-157

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  • Bibliothèque : Université de Nantes. Service commun de la documentation. BU Santé.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 02 NANT 25-VS
  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire de santé (Paris). Pôle pharmacie, biologie et cosmétologie.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : MFTH 2732
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