Etude structurale et biochimique de la proséquence de la protégrine

par Jean Frédéric Sanchez

Thèse de doctorat en Sciences de la vie et de la santé. Sciences biologiques. Biologie cellulaire

Sous la direction de André Aumelas.


  • Résumé

    Chez le mammifères, de nombreux peptides antibactériens de séquences diverses possèdent une proséquence fortement homologue appelée motif cathélicidine. On peut supposer qu'elle intervient dans le transport et / ou dans le stockage d'antibactériens inactifs prêts à être libérés lors d'une agression bactérienne. Les protégrines ( PG, 16-18 résidus, 2 ponts disulfures), peptides antibactériens à large spectre d'activité, sont produites à partir d'un précurseur inactif composé d'un peptide signal, du motif cathélicidine ( ProS,. 30-130) et de PG (131-147/148). Leur libération se fait par clivage de la liaison V130 - R131 par l'élastase. Bien que largement répandue, la structure 3D du motif cathélicidine (104-114 résidus, 2 ponts disulfures) n'étant pas connue. L'objectif du projet vise donc à déterminer la structure de ProS. Pour cela, un vecteur d'expression de ProS dans E. Coli a d'abord été mis au point, pour ensuite produire la protéine native et uniformément marquée ( N15 et N15/C13) en quantité suffisante pour entreprendre son étude structurale à la fois par RMN et par radiocristallograohie. L'étude RMN a révélé pour ProS un repliement de type cystatine, composé d'une hélice N-terminale entourée par un feuillet beta constitué de 4 brins antiparallèles. Cette étude à également révélé une isomérie cis-trans des liaisons amides R87-P88 et D118-P119 donnant lieu à 4 conformères en échange lent dont la population dépend du PH. Par cristallographie, grâce à une stratégie originale qui consiste à remplacer les cystéines par des sélénocystéines et ainsi permettre l'utilisation des techniques MAD, la structure en solution a été confirmée. De plus, il a été montré que ProS dimérise par échange de domaine. Cette aptitude semble être un caractéristique du repliement de type cystatine. L'obtention de la structure de ProS devrait contribuer à mieux comprendre son rôle dans le processus de maturation des peptides antibactériens

  • Titre traduit

    Biochemical and structural studies of prosequence of the protegrin


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Informations

  • Détails : 1 vol. (176-IV p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. f 41-49

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire. Section Pharmacie.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TP 2002.MON-2
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