Transfert de fructosyls à partir de saccharose chez bacillus subtilis NCIMB 11871 et 11872 : caractérisation des enzymes impliquées

par Karine Wisselmann

Thèse de doctorat en Biologie, santé, biotechnologies. Microbiologie

Sous la direction de Didier Combes.

Soutenue en 2002

à Toulouse, INSA .


  • Résumé

    Le travail présenté dans ce manuscrit de thèse concerne une fructosyl transférase produite par deux nouvelles souches de Bacillus subtilis. La fructosyl transférase est une enzyme catalysant le transfert d'un résidu fructose d'un donneur, en général le saccharose, sur un accepteur, par synthèse d'une liaison ß(2->1). Lorsque cet accepteur est une seconde molécule de saccharose ou l'un de ses homologues supérieurs, la réaction donne naissance aux fructooligosaccharides, sucres d'un grand intérêt industriel lié à leurs propriétés. Deux activités saccharolytiques ont été mises en évidence en plus de l'activité fructosyl transférase recherchée : une saccharose et une lévane saccharase. Afin de pouvoir étudier la fructosyl transférase seule, nous avons essayé de séparer les trois activités enzymatiques, tout d'abord en agissant sur leur apparition en cours de culture, puis en utilisant des techniques de séparation plus traditionnelles. Devant l'infructosité de ces essais, nous avons supposé que ces trois activités provenaient de la même enzyme, la lévane saccharase. La recherche du gène codant pour cette enzyme, son séquençage et sa délétion du génome des bactéries étudiées ont été nécessaires pour confirmer cette hypothèse.

  • Titre traduit

    Characterization of the enzymatic activities catalysing fructosyl transfer from sucrose in bacillus subtilis NCIMB 11871 and 11872 supernatant


  • Résumé

    The subject of this thesis deals with a fructosyl transferase from recently isolated Bacillus subtilis strains. Frcutosyl transferase enzyme is mostly described as acting on sucrose to serve the beta (2->1) bond between fructose and glucose and to transfer the resulting fructose to sucrose. This reaction yields fructooligosaccharides (FOS), I. E. Fructose oligomers in which fructosyl units are bound at the beta (2->1) position of sucrose. Fos have been of increasing importance because of their favourable functionalities. Two other saccharolytic activities were identified : a sucrase and a levansucrase. To study these activities independently, we tried to separate them, firstly obtaining them separately during the bacteria culture, secondly using traditional purification and separation techniques. The methods tested all failed, so that we supposed these activities were catalysed by the same enzyme, I. E. A levansucrase. To confirm this hypothesis, we isolated the levansucrase gene, SACB, determined its sequence and deleted it from B. Subtilis genome.

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 187 p.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p. 171-182

Où se trouve cette thèse\u00a0?

  • Bibliothèque : Institut national des sciences appliquées. Bibliothèque centrale.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 2002/650/WIS
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.