Contribution a l'etude de la reaction de tyrosylation des arnt et des pseudo-arnt

par PIERRE FECHTER

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de Richard Giegé.

Soutenue en 2001

à Strasbourg 1 .

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  • Résumé

    La reaction d'aminoacylation des arn de transfert par les aminoacyl-arnt synthetases est une etape cruciale pour le maintien de la fidelite de la traduction de l'information genetique. Le travail presente dans ce memoire concerne la recherche des determinants d'identite de l'arnt t y r de levure et d'un variant structural naturel des arnt, le pseudo-arnt du virus de la mosaique du brome (vmb), ainsi que l'etude de l'evolution de cette identite entre les eucaryotes et les archaebacteries. La determination de l'identite tyrosine a necessite la mise au point d'une methode de transcription in vitro sequence-independante des genes des arnt par la t7 arn polymerase qui est basee sur l'utilisation d'un arn autocatalytique, ou ribozyme. L'etude fonctionnelle de variants de l'arnt t y r ainsi produits a permis de montrer que l'identite tyrosine chez la levure est geree par 6 nucleotides : la premiere paire de bases de la branche acceptrice, la base discriminatrice et le triplet de l'anticodon. Leur transplantation dans 4 arnt differents confirme l'integrite de ce jeu de nucleotides d'identite et de montrer que son expression ne depend pas du contexte structural de l'arnt dans lequel il est insere. La realisation d'empreintes entre la tyrrs et l'arnt t y r par des sondes enzymatiques nous a permis de confirmer le mode d'interaction singulier entre ces deux molecules. L'identification des determinants tyrosine dans un organisme archaebacterien, methanococcus jannaschii a montre que l'identite tyrosine est conservee entre la levure et m. Jannaschii, bien que son mode d'expression soit legerement different. Enfin, nous avons caracterise les proprietes de tyrosylation du pseudo-arnt du vmb qui sont dues a la presence, dans le pseudo-arnt,

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Informations

  • Détails : 210 p.
  • Annexes : 485 ref.

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