Lipides modifies pour l'etude des biomembranes

par YOSHIKATSU OGAWA

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de Yoichi Nakatani.

Soutenue en 2001

à Strasbourg 1 .

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  • Résumé

    Nous avons developpe une methode chimique pour determiner directement la topographie membranaire de la glycophorine a, une sialoglycoproteine majeure des erythrocytes humains. Nous avons d'abord etabli une procedure de reconstitution des proteoliposomes, composees de dmpc, de dmps, de cholesterol, d'une sonde tritiee transmembranaire photosensible et de proteine. Ensuite, le photomarquage de ces proteoliposomes, suivie d'une digestion trypsique, d'une delipidation, et d'une electrophorese sur gel, a fourni un fragment peptidique marque. L'analyse de la distribution de la radioactivite sur la sequence des acides amines (degradation d'edman) de ce peptide a montre que la radioactivite etait limitee aux residus val 80 et met 81 localises au centre du domaine transmembranaire de cette proteine. L'utilisation en tandem de la sonde bola-amphiphilique photosensible et du cholesterol a donc permis de determiner le centre du domaine transmembranaire de la glycophorine a dans une membrane par fonctionalisation selective de cette proteine dans la bicouche phospholipidique. Par ailleurs, nous avons synthetise differents types des lipides modifies et etudie leurs prorietes membranaires : - nous avons demontre que l'addition des n-acyl-phosphatidylethanolamines aux liposomes d'une phosphatidylcholine diminue la permeabilite de la carboxyfluoresceine de la membrane. - nous avons developpe une serie d'amide-lipides, qui permettent d'induire la fusion entre une liposome et une membrane selon le ph. Ces amide-lipides possedent deux chaines acylees et une tete-polaire alkylee par un acide gras. - une reconnaissance moleculaire sur la surface d'une cellule a ete observe par une fixation efficace des liposomes incorporant des lipopeptides. Ces lipopeptides ont ete synthetises par couplage des amide-lipids decrites ci-dessus avec un ligand peptidique d'un recepteur localise sur la surface de la cellule.

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Informations

  • Détails : 100 p.
  • Annexes : 185 ref.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Blaise Pascal.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : Th.Strbg.Sc.2001
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