Conséquences physiopathologiques des changements conformationnels de protéines impliquées dans la fibrinolyse : étude à l'aide d'anticorps monoclonaux et de la résonance plasmonique de surface

par Miguel Dominguez-Hernandez

Thèse de doctorat en Hémostase, coagulation

Sous la direction de Eduardo R. Anglés-Cano.

Soutenue en 2001

à Paris 11 , en partenariat avec Laboratoire de recherche vasculaire translationnelle (Paris) (laboratoire) et de Université de Paris-Sud. Faculté de médecine (Le Kremlin-Bicêtre, Val-de-Marne) (autre partenaire) .

Le président du jury était Marie-Claude Guillin.

Le jury était composé de Eduardo R. Anglés-Cano, Marie-Claude Guillin, Vincent Durlach, Pascale Gaussem, Catherine Neumann.

Les rapporteurs étaient Vincent Durlach, Pascale Gaussem.

mots clés

• Néoepitopes
• Maladies autoimmunes
• Lipoprotéine A
• Apolipoprotéine A
• Plasminogène
• Fibrinolyse
• Activateur tissulaire du plasminogène

Résumé

La liaison d'un ligand à son récepteur ou accepteur physiologique entraîne desmodifications conformationnelles lui permettant d'exposer de nouvelles structures ayant des propriétés antigéniques différentes. Ces structures pourraient se comporter comme des néo-epitopes et déclencher une réponse auto-immune. Nous avons montré chez des patients atteints de maladies auto-immunes ou d'une pathologie vasculaire, la présence d’auto-anticorps dirigés rontre des néo-épitopes révélés par la liaison du t-PA et du plasminogène à la fibrine. Nous avons reproduit ce phénomène à l'aide d'anticorps monoc!onaux développés contre des épitopes conformationnels induits par la liaison de l'apo(a) et du plasminogène à la surface de la fibrine. Un de ces anticorps, l’Al0. 2, dirigé contre la poche hydrophobe du LBS du kringle 4, inhibe la liaison de l'apo(a) à la tïbline mais ne moditïe pas la liaison du plasminogène car il possède un deuxième site de liaison à la fibrine de haut affinité au niveau du kringle 1. En conclusion, les études présentées ici apportent des données qui permettent de préciser l'intérêt et l'importance de l'utilisation des surfaces biologiques pour la recherche d'auto-anticorps et la production d'anticorps monoclonaux dirigés contre des épitopes ayant un impact dans la physiopathologie de l'athéro-thrombose.

Titre traduit

Pathophysiological consequences of conformational changes of fibrinolytic proteins : a study with monoclonal antibodies and surface plasmon resonance analysis

Résumé

The binding of a ligand to its receptor or to a physiological acceptor induces conformational modifications leading to exposure of new structures bearing different antigenic properties. These structures could behave as neo-epitopes, and trigger an autoimmune response. We have shown the presence of autoantibodies directed against ligand-induced neo-epitopes in t-PA and plasminogen bound to fibrin in patients suffering from autoimmune or vascular pathology. This ligand-induced neoepitope phenomenon was reproduced with the use of monoclonal antibodies directed against plasminogen and apo(a) bound to fibrin. One monoclonal antibody named Al0. 2, directed against the hydrophobic trough of the LBS of klingle 4 inhibits the binding of apo(a) to fibrin. Of note, plasminogen binding to fibrin was not affected, most probably due to the presence of a high affinity LBS in kringle 1. In conclusion, the studies reported here stress the importance of biological surfaces in the search of auto-antibodies and in the development of monoclonal antihodies directed against epitopes, which are important in the pathophysiology of athero-thromhosis.