Etude de la régulation de la voie de signalisation AMPc-PKA chez Saccharomyces cerevisiae : effet des stress sur le facteur d'échange Cdc25p

par Lili Wang

Thèse de doctorat en Biologie

Sous la direction de Michel Jacquet.

Soutenue en 2001

à Paris 11 .


  • Résumé

    Cdc25p, un facteur d'échange pour Ras, est un des éléments de la voie AMPc-PKA chez Saccharomyces cerevisiae. Nous avons montré que cette protéine interagit avec les chaperons Hsp70 et Hsp90 in vitro et in vivo. De plus, nos résultats suggèrent que la protéine Cdc25p et la voie AMPc-PKA sont soumises au contrôle des ces chaperons. Les facteurs de transcription, Msn2p et Msn4p, sont activés par les divers stress. L'étude de la localisation nucléaire et de l'état de la phosphorylation de Msn2p, a montré que la voie AMPc-PKA est impliquée dans la signalisation du stress osmotique. La voie AMPc-PKA fonctionne alors, de façon redondante avec la voie HOG pour contrôler la réponse de Msn2p. De plus, ces deux voies agissent différemment sur la résistance au stress osmotique. En réponse au choc thermique, la quantité de Cdc25p diminue, par contre, sa transcription, sa localisation et son état de la phosphorylation ne présentent pas de modification significative. La diminution de la quantité de Cdc25p a été observée également dans le stress oxydant et le stress à l'éthanol. Chez la souche sauvage, le niveau intracellulaire d'AMPc est faible en absence des stress et augmente lorsque la souche est soumise aux stress. Par contre, en absence des stress, la concentration d'AMPe est beaucoup plus élevée chez les mutants tpk^w qui ont perdu le rétrocontrôle de la PKA sur le niveau de l'AMPc, elle diminue dans ces souches en réponse aux différents stress. On en conclut donc que la voie AMPc-PKA est impliquée dans la signalisation du stress. Celle-ci pourrait être contrôlée par une réduction de la quantité de Cdc25p provoquée par la dissociation du complexe de Cdc25p et des chaperons Hsp70 et Hsp90.


  • Résumé

    Cdc25p, an exchange factor for Ras, is one of the upstream elements of the cAMP-PKA pathway in Saccharomyces cerevisiae. We showed that this protein interacted with the chaperones Hsp70 and Hsp90 in vitro and in vivo. Moreover, the results suggested that the protein Cdc25p and the cAMP-PKA pathway were under the control of these chaperones. The transcriptional factors, Msn2p et Msn4p, are activated by diverses stress. Using parameters, such as nuclear localization and the state of phosphorylation of Msn2p, we demonstrated that the cAMP-PKA pathway was involved in the signalization of osmotic stress. Under this condition, the cAMP-PKA pathway played a redundant role with the HOG pathway on the control of the response of Msn2p. Furthermore, these two pathways had different contributions on the resistance to osmotic stress. In response to heat shock, the quantity of Cdc25p decreased, whilst on the contrary, its transcription, localization and state of phosphorylation did not show any significant modification. Such a decrease in quantity of Cdc25p was also observed under oxidative and high ethanol concentration stress. In the wildtype strain, the intracellular level of cAMP was quite low under normal conditions and increased a little in response to stress. In contrast, in the tpk^w strain, the level was much higher in the cells without stress and exhibited a decrease in response to stress. In conclusion, the cAMP-PKA pathway is involved in the signalization of stress. A decrease in the level of Cdc25p, provoked by dissociation with the chaperones Hsp70 and Hsp90, might be important for this involvement.

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Informations

  • Détails : 175 p.-6 f.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p.154-175.

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  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : M/Wg ORSA(2001)370
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