Microscopie de fluorescence sous excitation à deux photons : application à des études de corrélations et de déclins de fluorescence en milieu biologique

par Elvire Guiot

Thèse de doctorat en Physique

Sous la direction de Alain Brun.

Soutenue en 2001

à Paris 11 .


  • Résumé

    Ce mémoire présente la mise en place d'un système complet de microscopie de fluorescence basé sur le processus non linéaire d'absorption à deux photons. Cette technique récente de microscopie biphotonique est caractérisée par de nombreux avantages pour l'étude d'échantillons biologiques, notamment en terme de limitation des photodommages. Combinée à des méthodes d'analyse de la dynamique d'émission de fluorescence, elle permet l'étude à la fois spatiale et temporelle de l'émission de fluorescence. Dans ce contexte, nous avons développé deux techniques d'analyse résolue en temps de la fluorescence. Une première technique d'analyse dynamique, la microscopie de corrélation de fluorescence, basée sur des mesures en micro-volume et sur une faible concentration moléculaire, a essentiellement été appliquée à l'étude du processus de diffusion translationnelle. En particulier, la microscopie de corrélation de fluorescence a permis, avec la sensibilité de détection d'une molécule unique, la détermination des coefficients de diffusion de sondes souvent utilisés en biologie. . .

  • Titre traduit

    Two-photon fluorescence microscopy : applications to fluorescence correlation and lifetime measurements in biological media


  • Résumé

    This thesis presents the development of a fluorescence microscope based on the non linear process of two-photon absorption. This new type of fluorescence microscopy characterized by a intrinsic three-dimensional spatial resolution comparable to those of the confocal microscope, offers also many advantages for biological studies, in particular in terms of restriction of the photodamages. Combined with time resolved techniques, two-photon microscopy allows imaging with high space and time resolutions and opens up new opportunities for biological dynamics studies. In this context, two time resolved techniques for fluorescence analysis under two-photon excitation have been developed. The first time resolved technique, the fluorescence correlation microscopy, based on measurements in micro-volumes with weak molecular concentration, has been essentially applied to the study of translational diffusion processes. In particular, the technique has allowed the determination, at the single molecule level, of the diffusion coefficient of various fluorescent biological probes. . .

Autre version

Cette thèse a donné lieu à une publication en 2005 par [CCSD] [diffusion/distribution] à Villeurbanne

Microscopie de fluorescence sous excitation à deux photons : application à des études de corrélations et de déclins de fluorescence en milieu biologique

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La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 216 p.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p. 193-206

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : M/Wg ORSA(2001)307
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