Etude de l'interaction entre les thiorédoxines et leurs enzymes cibles : application à la recherche de nouveaux partenaires chez l'algue verte Chlamydomonas reinhardtii

par Aymeric Goyer

Thèse de doctorat en Sciences biologiques

Sous la direction de Myroslawa Miginiac-Maslow.

Soutenue en 2001

à Paris 11, Orsay .


  • Résumé

    Le processus d'activation de la MDH à NADP choroplastique par les TRX est étudié par formation d'un disulfure mixte entre l'enzyme cible et la TRX. Le rôle de la Cys207 de la MDH est examiné par sa capacité à former des disulfures avec une TRX mutée sur une des Cys de son site actif. Les deux mutants de TRX forment des disulfures mixtes avec une MDH dépourvue dc son pont N-terminal. Ils sont faiblement efficaces avec la MDH sauvage oxydée. Lorsque la Cys207 est mutée, aucun disulfure mixte n'est formé, montrant que cette Cys est la seule, parmi les Cys internes, à former des disulfures avec la TRX. Ces expériences confirment que la réduction du pont N-terminal entreîne un relâchement dans l'interaction entre les sous-unités, rendant la Cys207 plus accessible. Quatre MDH différentes mutées sur une des Cys des ponts disulfures régulateurs sont examinées. Les résultats montrent que l'attaque de la TRX sur le pont C-terminal se fait sur la Cys377. . .


  • Résumé

    The activation pathway of chloroplastic NADP-MDH by thioredoxin was examined using the formation of a mixed disulfide between the target and the reductant. The role of the Cys207 of MDH was investigated through the examination of the ability of this residue to form mixed-disulfides with thioredoxin mutated at either of its two active-site cysteines. Both thioredoxin mutants proved efficient in forming disulfides with a MDH devoid of its N-terminal bridge. They were poorly efficient with the WT oxidized MDH. Upon mutation of Cys207, no mixed disulfide could be formed, showing that this cysteine is the only one, among the internal cysteines, which can form mixed disulfides with thioredoxin. These experiments confirm that the opening of the N-terminal disulfide loosens the interaction between subits making Cys207 more accessible. . .

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Informations

  • Détails : 213 p.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p.107-124.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : M/Wg ORSA(2001)292
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