Topologie des sites actifs des cytochromes p450 humains de la famille 2c : recherche d'inhibiteurs specifiques, modelisation moleculaire et comparaison des cytochromes p450 2c9 et 2c19

• Auteur / Autrice : Nguyêt-Thanh Ha-Duong
• Direction : Daniel Mansuy
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 2001
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

L'etude de la topologie des sites actifs des cytochromes p450s de foie humains est importante car ces enzymes sont responsables du metabolisme de nombreux composes endogenes et exogenes. Les cytochromes p450s de la sous-famille 2c representent environ 20% des p450s hepatiques humains et sont fortement impliques dans le metabolisme des medicaments. Les cyp 2c8, 2c9, 2c18 et 2c19 presentent plus de 80% d'homologie de sequence et peuvent prendre en charge des substrats de structure et de taille tres variees. Des etudes menees precedemment au laboratoire ont permis de proposer une topologie du site actif des cyp 2c9 et 2c18. Les objectifs de ce travail ont ete d'affiner le modele du cyp 2c9, de proposer une topologie du site actif du cyp 2c9 qui presente une forte homologie de sequence avec le cyp 2c9, et de comparer ces deux enzymes. Ce travail a ete mene selon trois approches : - nous avons construit par modelisation moleculaire des modeles tridimensionnels des cyp 2c9 et 2c19 et etabli une comparaison entre les deux proteines. Lors de la publication de la structure du premier p450 membranaire cristallise, nous avons ainsi valide les methodes utilisees au laboratoire. - le modele du site actif du cyp 2c9 a pu etre affine grace a la recherche de nouveaux substrats et inhibiteurs (molecules derivees de l'acide tienilique et du sulfaphenazole). Cette etude a aussi permis la mise au point d'inhibiteurs selectifs pour d'autres cyp 2c. Nous avons egalement etabli que la ticlopidine, un inhibiteur du cyp 2c19, est un substrat suicide specifique de cette isoforme. - enfin, afin d'obtenir un modele de la topologie du site actif du cyp 2c19 en comparaison avec celle du cyp 2c9, nous avons etudie des proteines chimeriques 2c9/2c19 (en collaboration avec j. A. Goldstein, usa). Chaque proteine a ete testee pour sa capacite a prendre en charge des substrats specifiques du cyp 2c9 mais aussi du cyp 2c19.