Diversite genetique, constitution chromosomique et expression genetique chez la levure fromagere halotolerant debaryomyces hansenii

par MAURICIO CORREDOR RODRIGUEZ

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de CLAUDE GAILLARDIN.

Soutenue en 2001

à PARIS 11, ORSAY .

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  • Résumé

    Dans ce travail nous avons construit des sondes specifiques a partir de fragments de rapd (amplification aleatoire d'adn polymorphe), qui nous a permis de developper une methode rapide et sensible pour l'identification de la levure d. Hansenii. La sonde f01pro a permis de typer les souches de d. Hansenii des ecosystemes fromageres. Les profils obtenus par rflp (polymorphisme de la longueur des fragments de restriction) avec la sonde f01pro discrimine les souches de d. Hansenii et releve un polymorphisme notable. L'analyse de ce polymorphisme par la methode upgma a mis en evidence une diversite genetique importante chez d. Hansenii, tout a fais, independante de l'origine geographique et de type de production fromagere. Cette heterogeneite significative au sein de d. Hansenii a ete correle avec les profils chromosomiques obtenus par pfge (electrophorese en champ pulse). L'analyse de caryotypes en southern blot a permis de confirmer le caractere repetitif des sondes specifiques telles que f01pro, le retrotransposon copia-like et une sequence telomerique hypothetique. De plus, les genes ribosomiques ont ete retrouves dans le chromosome le plus grand. Nous avons evalue les sondes specifiques en ecologie moleculaire afin d'etudier des micro-ecosystemes de populations de d. Hansenii. L'hybridation sur colonie avec la sonde f01pro a ete efficace pour identifier d. Hansenii au milieu des autres especes. La pcr in situ avec les amorces specifiques obtenues a partir de retrotransposon copia-like identifie specifiquement les cellules de d. Hansenii. Cependant, l'hybridation in situ d'une sonde specifique de ce retrotransposon n'a pas permis d'identifier d. Hansenii. Par ailleurs, nous n'avons pas trouve de sonde specifique capable d'identifier a la fois les deux varietes de d. Hansenii. Comme d'autres auteurs, nous avons conclu, en utilisant des outils moleculaires, que la variete fabriyii serait mieux classee comme l'espece d. Fabryii. Finalement, nous avons voulu etudier un des role biochimique de d. Hansenii dans les produits laitiers et le fromage. Nous avons etudie en particulier l'activite -galactosidase et les genes associes a cette activite lac4 et lac12. L'activite -galactosidase dans d. Hansenii a ete determine comme constitutive et le gene de lactose permease lac12 a ete identifie et partialement caracterise.


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Informations

  • Détails : 179 p.
  • Annexes : 316 ref.

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  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
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