L'adaptation au froid de l'aspartate transcarbamylase chez la bacterie psychrophile tad1

par KARINE SUN

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées. Sciences médicales

Sous la direction de GUY HERVE.

Soutenue en 2001

à Paris 6 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Le sujet de cette these est l'etude de l'aspartate transcarbamylase (atcase) chez une bacterie psychrophile provenant de l'antarctique, tad1. L'etude cinetique a differentes temperatures (entre 0\c et 55\c) de l'atcase de tad1 a montre un deplacement vers les basses temperatures de la courbe de dependance de l'activite en fonction de la temperature par rapport a l'observation faite chez l'enzyme d'e. Coli. A basse temperature, l'energie d'activation (ea) de l'atcase de tad1 est plus faible que celle de l'enzyme d'e. Coli. Ceci parait resulter d'une diminution de l'entropie d'activation de la reaction (s ) et non de la valeur du g d'activation de la reaction, suggerant qu'au moins au niveau du site catalytique, l'atcase de tad1 presente a basse temperature une flexibilite plus grande que l'atcase d'e. Coli. Le clonage du gene de l'atcase a montre la presence de deux orf de 996 pb et de 1209 pb separes par une sequence inter genique de 108 nucleotides. L'orf1 presente la plus grande identite avec le gene pyrb codant pour la chaine catalytique de l'atcase des pseudomonidae et l'orf2 avec le gene de la pseudo-dihydroorotase (p-dhoase inactive) qui entre dans l'organisation structurale de ces atcases. L'analyse de la structure primaire et la modelisation des structures secondaire et tertiaire indique une organisation en trimeres de chaines catalytiques. De plus, la modelisation de la chaine catalytique de tad1 a montre une structure tridimensionnelle tres semblable a la structure cristallographique de l'atcase d'e. Coli. Toutefois, deux differences d'orientation de chaines laterales du site catalytique (his 134 et arg 229 chez e. Coli) sont egalement observees dans la structure modelisee de pseudomonas putida. La separation chromatographique de l'atcase et de la dhoase confirme que la chaine de la p-dhoase ne possede pas d'activite catalytique et la determination de la masse moleculaire de l'atcase de tad1 (440 kda) suggere que cette atcase est de type a1.


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Informations

  • Détails : 230 p.
  • Annexes : 168 ref.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 2001
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