Etude structurale de macromolecules biologiques par cryomicroscopie electronique, reconstruction tridimensionnelle et recalage de donnees de cristallographie aux rayons x

par FABRICE MOUCHE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de Nicolas Boisset.

Soutenue en 2001

à Paris 6 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Parmi les disciplines representatives de la biostructure, la cryomicroscopie electronique permet, au travers de techniques adaptees, d'atteindre de hautes resolutions sur des assemblages macromoleculaires. Mon travail a porte sur l'etude d'une categorie de molecules, les particules isolees a faible degre de symetrie et entre autres sur les pigments respiratoires extracellulaires tels que les hemocyanines de cephalopodes (vampyroteuthis infernalis, benthoctopus species, sepia officinalis) et une hemoglobine d'annelide (lumbricus terrestris). Une approche empirique a ete retenue, et nous a permis de differencier les informations techniques et les donnees biologiques. Le premier but, base sur l'utilisation d'un materiel biologique connu, etait de travailler sur les techniques d'observation de l'echantillon, d'analyse des images, de reconstruction et de correction des structures. Le deuxieme but etait d'apporter des reponses de type biologique, par le biais de ces ameliorations techniques. Le debut de ma these fut lie a l'utilisation d'un microscope equipe d'une cathode lab 6, ne permettant pas de descendre significativement sous la barre des 20 a de resolution. Neanmoins, il nous a permis de repondre a une question de type phylogenetique (benthoctopus species et vampyroteuthis infernalis appartiennent a des ordres freres), et de demontrer l'importance du type de microscope et de la source electronique associee. Naturellement, l'etape suivante fut d'acceder a un microscope equipe d'un canon a emission de champ. L'acces sporadique et sur de courtes periodes a ce type de microscope, dont les premiers exemplaires destines aux biologistes sont arrives en france en 2000, ne m'ont pas permis de tester systematiquement tous les modes d'utilisation. Malgre tout, les resultats que nous avons obtenu ont valide les avantages de l'emission de champ. Certes, la barre des 6-7 a de resolution, donnant partiellement acces aux informations relatives a la structure secondaire des proteines, n'a pas encore ete atteinte, mais il apparait que les progres que nous avons effectues tendent vers cette valeur. Cette progression repose en partie sur l'amelioration des methodes de collecte des images, de reconstruction et. . .


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Informations

  • Détails : 245 p.
  • Annexes : 134 ref.

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  • Consultable sur place dans l'établissement demandeur
  • Cote : T Paris 6 2001 176
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 2001
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