Contribution a l'etude biochimique du complexe cytochrome b 6f de chlamydomonas reinhardtii : manipulation in vitro et stabilisation, organisation spatiale des hemes et spectroscopie de la chlorophylle a

par ELODIE CHABAUD

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de JEAN-LUC POPOT.

Soutenue en 2001

à Paris 6 .

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  • Résumé

    Le cytochrome b 6f de chlamydomonas reinhardtii a ete etudie dans une double optique. D'une part, c'est un complexe tres fragile, ce qui en fait un bon modele pour le developpement de nouveaux tensioactifs destines a faciliter la manipulation in vitro des proteines membranaires integrales. Le cytochrome b 6f presente par ailleurs un grand interet propre, car il reste le complexe photosynthetique de loin le moins bien connu. Nos mesures de dichroisme lineaire et circulaire suggerent que l'organisation spatiale des hemes b des cytochromes b 6f et bc 1 (son homologue mitochondrial) sont similaires. Chaque dimere de cytochrome b 6f contient deux molecules de chlorophylle a, dont la fonction et la localisation sont encore inconnues. Nous montrons l'existence dans nos preparations de plusieurs populations de chlorophylles de durees de vie de fluorescence differentes, correspondant probablement a des molecules liees sur le site natif, liees sur un site partiellement demasque, ou en solution dans le detergent. L'existence d'un signal de dichroisme circulaire excitonique suggere que les deux chlorophylles presentes au sein de chaque dimere sont suffisamment proches l'une de l'autre pour interagir electroniquement. Bien qu'indispensables a la solubilisation et a la manipulation des proteines membranaires en solution aqueuse, les detergents induisent frequemment une destabilisation pouvant aller jusqu'a la denaturation. Deux mecanismes entrent probablement en jeu dans ce phenomene : la dilution dans la phase micellaire de cofacteurs essentiels a la stabilite de la proteine, et une intrusion directe du detergent dans la region transmembranaire de celle-ci. Partant de l'observation que les perfluoroalcanes sont des molecules relativement rigides et peu miscibles avec les hydrocarbures, nous avons mis au point un tensioactif hemifluore, non detergent mais neanmoins capable de maintenir en solution le cytochrome b 6f sous une forme intacte, active, monodisperse et stable.


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Informations

  • Détails : 281 p.
  • Annexes : 182 ref.

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  • Disponible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 2001
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