Les gênes codant les acetylcholinesterases chez le nematode caenorhabditis elegans

par Didier Combes

Thèse de doctorat en Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie

Sous la direction de Martine Arpagaus.


  • Résumé

    La thèse est consacrée à l'étude des gènes codant pour l'acétylcholinestérase (AChE, EC 3. 1. 1. 7. ) chez les nématodes Caenorhabditis elegans et C. Briggsae. Nous avons cloné et séquencé ace-2 du chromosome I et identifié la mutation nulle ace-2 (souche g72). Une mutation point G441E introduit une charge négative dans l'environnement immédiat de l'His 440, et perturbe le relai de charges indispensable à l'activité catalytique. Au locus ace-3 du chromosome II, nous avons identifié deux phases ouvertes de lectures codant pour des AChEs, dans la même orientation mais séparées par 356 nt et 371 nt chez C. Elegans et C. Briggsae. Le gène situé en aval est ace-3 car lui seul contient une délétion qui supprime l'activité catalytique dans la souche mutante ace-3 (p1304). Les messagers de ace-1 sont trans-épissés par SL1, ceux de ace-2, ace-3 et ace-4 par SL1 et SL2. Le tandem ace-3/ace-4 est transcrit sous forme d'un messager bicistronique, indiquant que les deux gènes ont un promoteur commun. Il n'y a pas d'autres gènes dans le voisinage de ace-3/ace-4 qui constituent donc un opéron de deux gènes. L'expression tissulaire spécifique des gènes ace a été étudiée par injection in vivo de constructions où la GFP est sous le contrôle de régions promotrices de chaque gène. Nous avons confirmé l'expression essentiellement musculaire de ace-1 par des injections de vecteurs où les régions promotrices de ace-1 de C. Briggsae sont utilisées dans C. Elegans. Pour ace-2, nous avons mis en évidence une expression dans les neurones de la tête et des ganglions postérieurs. Les régions 5' de ace-3/ace-4 dirigent l'expression dans quelques neurones céphaliques et postérieurs, les cellules CAN, les cellules pm3, pm4, pm5 et pm7 du pharynx et les rangées médianes des quadrants musculaires dorsaux.

  • Titre traduit

    Genes encoding acetylcholinesterases in the nematode caenorhabditis elegans


  • Résumé

    Our work has been focussed on the caracterisation of the genes encoding acetylcholinesterases (EC 3. 1. 1. 7. ) in the nematodes Caenorhabditis elegans and C. Briggsae. We have cloned and sequenced ace-2, located on chromosome I, and we identified the origin of the null mutation of strain g72 : a point mutation G441E introduces a negative charge in the environment of H440, a crucial residue in the charge relay system and the catalytic activity. At the locus of ace-3 on chromosme II, we identified two open reading frames, both encoding AChEs. These ORFs are in the same orientation separated by only 356 and 371 nt in C. Elegans and C. Briggsae respectively. The downstream gene has been identified as ace-3 because it is the only sequence that possesses a deletion in the mutant strain ace-3 (p1304). Ace-1 mRNAs are trans-spliced by SL1, whereas those of ace-2, ace-3 and ace-4 are trans-spliced by both SL1 and SL2. The tandem ace-3/ace-4 is transcribed as a bicistronic mRNA, which indicates that both genes are under the control of a common promoter. There is no other gene in the vicinity of ace-3/ace-4 which thus constitute a small operon of two genes. Tissue specific expression of ace genes has been studied by in vivo injection of reporter genes where GFP is driven by regulatory regions of each gene. We confirmed that ace-1 is mainly expressed in muscle cells by transforming C. Elegans with vectors containing the regulatory regions of ace-1 of C. Briggsae. For ace-2, we showed an expression in neurons of the head and of posterior ganglions. The lack of fluorescence in motoneurons of the ventral cord could be due to the absence, in our constructs, of a specific activator. 5' region of the tandem ace-3/ace-4 drove GFP expression in a few neurons in the head and the posterior ganglions, CAN cells, pm3, pm4, pm5 and pm7 of the pharynx and the medial rows of the dorsal muscle quadrants.

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Informations

  • Détails : 89 f.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. f. [81]-89. Résumés en français et en anglais

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  • Bibliothèque : Université Nice Sophia Antipolis. Service commun de la documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 01NICE5664
  • Bibliothèque : Université Nice Sophia Antipolis. Service commun de la documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 01NICE5664bis
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