Microdomaines membranaires isolés du rein du bœuf : caractérisation des protéines et des lipides constitutifs et étude de leurs interactions

par Stéphanie Bonnin

Thèse de doctorat en Sciences

Sous la direction de Françoise Besson.

Soutenue en 2001

à Lyon 1 .

Le jury était composé de Françoise Besson.


  • Résumé

    La présence de microdomaines membranaires résistant à froid au Triton X100 (CMRT) a été recherchée dans le cortex rénal bovin. Deux extractions successives des membranes totales en présence de 2 % de détergent permettent d'isoler, sur gradient de saccharose, des microdomaines enrichis en protéines à GPI. La composition en protéines et en lipides des CMRT a été comparée à celle des membranes totales. Les microdomaines sont enrichis en cavéoline, en phosphatase alcaline à GPI et en certaines protéines-kinases (essentiellement des sérines-kinases) ainsi qu'en cholestérol et en sphingomyéline. De plus, l'analyse des acides gras des différents phospholipides purifiés montre que la phosphatidylcholine et la phosphoéthanolamine sont globalement plus saturées dans la CMRT que dans les membranes totales. Pour étudier les interactions protéines-protéines et protéines-lipides de ces structures, une solubilisation progressive a été réalisée par l'octyl-β-D-glucopyranoside (βOG). Cette solubilisation se traduit par une diminution de turbidité à 450 nm. La libération progressive des constituants a été analysée. La moitié des protéines sont libérées pour 20-25 mM en βOG. Une concentration plus élevée en détergent nécessaire pour solubiliser 50% de la phosphatase alcaline. De plus, la sortie concomitante de cavéoline et de cholestérol confirme leur affinité réciproque. Enfin, une des sérine-kinases présentes possède une activité dépendante de l'intégrité des microdomaines. Les résultats obtenus sont discutés en fonction des modèles d'organisation des microdomaines déjà établis.


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Informations

  • Détails : 1 vol. (156 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 137-153

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  • Bibliothèque : Université Claude Bernard (Villeurbanne, Rhône). Service commun de la documentation. BU Sciences.
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