Influence de la pression sur les comportements cinétiques et structuraux de l'alcool déshydrogénase de foie de cheval (HLADH)

par Marie Trovaslet

Thèse de doctorat en Biochimie

Sous la direction de Marie-Dominique Legoy.

Soutenue en 2001

à La Rochelle .


  • Résumé

    La pression, de même que la température, est un paramètre susceptible de modifier la conformation et l'activité catalytique des biocatalyseurs. La connaissance exacte de son mode d’action passe par l'étude d'un grand nombre d'enzymes en milieu hyperbare. Notre recherche traite des comportements cinétiques et structuraux des alcool déshydrogénases sous pression. Nous avons étudié l'enzyme du foie de cheval (HLADH), celles de la levure (YADH) et de Thermoanaerobium brockii (TBADH). Dans une première partie, l'étude cinétique de HLADH a été menée sous pression, à deux températures. Les influences de la température et des substrats alcooliques ont été observées. Les analyses des paramètres cinétiques et volumétriques des différentes réactions ont mis en évidence l'effet protecteur de la température vis-à-vis de la pression. Elles ont aussi montré qu'à 29ʿC, la pression peut améliorer l'activité catalytique de l'enzyme, bien que son affinité apparente pour ses différents substrats soit largement affectée. Une attention particulière a enfin été portée à l'inhibition par excès d'alcool primaire, ainsi qu'à son évolution en fonction de la pression et de l'alcool considéré. Dans une seconde partie, une étude structurale a été effectuée enspectroscopie de fluorescence et en spectroscopie InfraRouge à Transformée de Fourier (FTIR). Elle a concerné HLADH, YADH et TBADH, dont les comportements cinétiques sous pression sont connus. Ces enzymes oligomériques subissent des modifications structurales sous pression, mais contrairement à ce qui est généralement admis, elles ne semblent pas se dissocier. Lors de la dénaturation hyperbare de HLADH, l'existence d'un ou plusieurs état(s) intermédiaire(s) de type molten globule a de plus été mise en évidence. Les dénaturations hyperbares et thermiques de ces enzymes ont enfin été comparées : les états dénaturés obtenus par l'une ou l'autre des méthodes sont différents.

  • Titre traduit

    Influence of high pressure on the kinetic and structural behaviour of horse liver alcohol dehydrogenase (HLADH)


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Informations

  • Détails : 1 vol. (193 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p. 183-193

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  • Bibliothèque : Université de La Rochelle. Bibliothèque universitaire.
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