Contribution à l'élaboration et à la lecture des puces à ADN

par François Bessueille

Thèse de doctorat en Électronique, électrotechnique et automatique

Sous la direction de Jean-René Martin.

Soutenue en 2001

à l'Ecully, Ecole centrale de Lyon .


  • Résumé

    Dans le cadre de ce travail, différents procédés d'élaboration et de lecture de puces à ADN ont été mis au point. La méthode retenue pour l'élaboration des puces consiste à fonctionnaliser par silanisation des structures de type Si/SiO2 avec le chlorodiméthylsilylundécanoate de méthyle (CDSUM), puis après hydrolyse et activation des esters de méhtyle au n-hydroxysuccinimide (NHS), un aminopolyoxyde d'éthylène, lui-même greffé sur les esters activés, joue le rôle d'espaceur et assure une couverture de la surface par des terminaisons alcools primaires. Les substrats ainsi préparés permettent la synthèse d'oligonucléotides par la chimie des phosphoramidites. Des systèmes d'adressages, tels que la projection par jets et la fluidique, ont été réalisés pour localiser les réactions de synthèse à la surface des puces. Parallèlement aux systèmes d'adressage mécanique, une méthode de multifonctionnalisation par micro tamponnage a été développée, permettant d'optimiser la surface des substrats. Des travaux sur la lecture des puces ont été conduits selon différents procédés, tels que l'optoélectrochimie sur structure EDS ou la cartographie de fluorescence. Puis ces techniques ont été validées par radio-imagerie et XPS. Des puces réutilisables 20 fois, sans altération de réponse, hybridables par des oligonucléotides complémentaires et des fragments PCR doubles brins de 1. 5 kb, ayant une limite de détection de 10aM pour des hybridations oligonucléotides contre oligonucléotides, soit 5. 3 10-4 brins / ưm2 ont été obtenues, la sélectivité étant réalisée au mismatch près.


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Informations

  • Détails : 1 vol. (192 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 167 réf.

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  • Bibliothèque : Ecole centrale de Lyon. Bibliothèque Michel Serres.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : T1912
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