Etude fonctionnelle de la proteine apparentee a l'actine arp5 et d'un de ses partenaires cellulaires afilp, dans la levure saccharomyces cerevisiae

par SANDRINE GRAVA

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de Barbara Winsor.

Soutenue en 2000

à Strasbourg 1 .

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  • Résumé

    Ce travail de these porte sur la caracterisation fonctionnelle de la proteine arp5. Le gene arp5 (ynl059c) a ete identifie au cours du sequencage systematique du genome de la levure s. Cerevisiae en 1995. Il code pour une proteine hypothetique de 755 aa qui presente 26% d'identite et 51% de similarite a l'actine. Des souches de levure deletees du gene arp5 montrent qu'il est tres important voire essentielle pour leur croissance cellulaire (selon leur contexte genetique). Les mutant arp5-d, ainsi que les mutants ponctuels arp5-ts, presentent des phenotypes pleiotropes (incapacite a metaboliser differentes sources de carbone, fragilite de paroi cellulaire, etc). L'integration d'une fusion arp5-gfp (green fluorescent protein) au locus chromosomique arp5 a permis de montrer que la proteine arp5 est nucleaire tout au long du cycle cellulaire. Afin de mieux apprehender ses fonctions nucleaires, nous avons recherche des partenaires fonctionnels ou physiques d'arp5p par l'intermediaire de cribles de suppresseurs-multicopies et de double-hybrides respectivement. La proteine jusqu'alors inconnue afilp (arp-five-interacting) est la seule a avoir ete selectionnee dans les deux cribles. La proteine de fusion afil-gfp est localisee dans le noyau tout au long du cycle. La diversite des phenotypes observes pour les mutants arp5 et afil nous a suggere l'implication d'arp5p et afilp dans une fonction nucleaire generale telle que la transcription ou la maturation des arnm. Des marquages immunologiques sur chromosomes ont montre qu'arp5p et afilp se fixent a la chromatine sous forme de points bien precis (env 15 a 60 par noyau). Par ailleurs, la caracterisation d'un phenotype spt (suppressor of ty) dans les mutants arp5-d suggere qu'arp5p est impliquee plus precisement dans la regulation de la structure chromatinienne. De plus, la sensibilite des mutants arp5 et afil a des agents dommageables pour l'adn indique qu'arp5p et afilp pourraient etre impliquees dans la reparation de l'adn. Les resultats decrits dans ce travail montre qu'arp5p et afilp interagissent physiquement pour remplir une fonction commune. Ils convergent vers l'implication d'arp5p dans le controle transcriptionnel ou la reparation de l'adn via le remodelage de la chromatine.


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Informations

  • Détails : 142 p.
  • Annexes : 265 ref.

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  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Blaise Pascal.
  • Disponible pour le PEB
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