Transplantation d'hepatocytes isoles : de la disponibilite en cellules humaines a l'application dans un modele rat in vivo

par PASCALE DAVID

Thèse de doctorat en Sciences médicales

Sous la direction de Lysiane Richert.

Soutenue en 2000

à Strasbourg 1 .

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  • Résumé

    L'objet de ce travail a ete dans un premier temps d'ameliorer la disponibilite en hepatocytes humains en evaluant la cryoconservation ou l'immortalisation des cellules afin de creer une banque hepatocytaire humaine et, dans un second temps d'evaluer l'efficacite de la thi dans un modele animal, le rat analbuminemique (nar) a partir de ces differentes sources cellulaires. Nous avons mis au point une technique d'isolement des hepatocytes humains par non perfusion. Cette technique, permettaient a partir de pieces d'exerese hepatique, d'utiliser des fragments de petite taille, presentant peu d'acces vasculaires et plusieurs tranches de section. Les essais d'immortalisation d'hepatocytes humains que nous avons realise se sont reveles infructueux faute de construction genique et de vecteur de transfection efficaces. Cependant, a partir de lignees hepatocytaires, nous avons verifie que des cellules presentant des capacites de proliferation etaient capables de presenter des fonctions metaboliques differenciees. Les essais de congelation d'hepatocytes humains realises a l'aide d'un protocole de congelation par descente en temperature programmee ont montre que du point de vue fonctionnel, en culture, les hepatocytes apres decongelation presentaient des capacites metaboliques similaires a celles d'hepatocytes fraichement isoles. En revanche, le rendement cellulaire apres decongelation etait faible (27% maximum). L'evaluation de l'efficacite de la thi a ete realisee in vivo dans une combinaison syngenique par la transplantation intrasplenique d'hepatocytes isoles normaux chez des rats analbuminemiques de souche sprague dawley mutante et a ete determinee par le suivi de la fonctionnalite (production d'albumine) et de l'implantation des cellules transplantees presentant un marquage albumine positif. Les resultats ont montre que la transplantation d'hepatocytes fraichement isoles se traduisait par une implantation et une fonctionnalite transitoire des cellules transplantees. La transplantation d'hepatocytes cryoconserves se traduisaient par une implantation deux fois moins importante comparee a celle d'hepatocytes fraichement isoles et par l'absence de fonctionnalite des cellules chez les animaux receveurs. Ces resultats refletaient a la fois la fragilite membranaire et les alterations membranaires liee a la congelation des cellules. La transplantation d'hepatocytes de rat immortalises, se traduisait par une implantation et une multiplication des cellules dans le parenchyme hepatique receveur mais par l'absence de fonctionnalite de ces cellules etant donne l'absence de secretion d'albumine par ces cellules in vitro. Nous avons par ailleurs montre que la thi en presence de signaux de regeneration hepatique induits par hepatectomie ou par ligature portale partielles ne permettaient qu'un doublement de l'implantation des hepatocytes transplantes et par la perte de fonctionnalite de ces cellules liee, selon le protocole, soit a l'apparition de processus de senescence rapide, soit a un etat peu differencies de ces cellules. Lors de notre etude, nous avons montre que les rats nar etaient resistants a l'induction chimique d'hepatite fulminante par la d galactosamine ou de cirrhose par le thioacetamide. De ce fait, nous n'avons pu juger de l'efficacite de la thi dans un modele d'insuffisance hepatique.


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Informations

  • Détails : 350 p.
  • Annexes : 287 ref.

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  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Blaise Pascal.
  • Disponible pour le PEB
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