Etude d'interactions faibles intra- et inter-moleculaires de biomolecules par spectrometrie de masse

• Auteur / Autrice : Hélène Rogniaux
• Direction : Alain Van Dorsselaer
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 2000
• Etablissement(s) : Strasbourg 1

Résumé

Des interactions faibles, non-covalentes, interviennent dans toutes les structures et tous les processus biologiques majeurs. L'apparition recente du mode d'ionisation par electrospray (es) a rendu possible leur etude par spectrometrie de masse. L'es presente en effet l'avantage d'analyser les echantillons en solution, dans des conditions propices au maintien de la structure tertiaire des proteines. Lorsque debute ce travail, la spectrometrie de masse es a ete appliquee avec succes pour caracteriser de nombreux systemes non-covalents biologiques. La technique est precise, rapide, et elle permet de deduire des informations telles que la stchiometrie du systeme, sa constante de formation en solution ou certaines de ses proprietes en phase gazeuse. Cependant, sur certains systemes, les resultats contredisent clairement le comportement attendu en solution ; ces anomalies remettent en question la pertinence de l'approche par spectrometrie de masse pour etudier des associations non-covalentes. Dans ce contexte, notre objectif est double : il s'agit de mieux definir les conditions d'application de cette nouvelle approche, et de demontrer en meme temps ses atouts analytiques en biologie en apportant des reponses a des problemes concrets. Nos resultats sont presentes en deux parties : une premiere partie est consacree a la description de l'approche et insiste sur les aspects experimentaux et instrumentaux qui conditionnent la reussite des analyses. La deuxieme partie illustre la variete des informations que l'on peut deduire du spectre de masse, sur quatre systemes biologiques : les complexes aldose reductase/inhibiteur, les complexes deshydrogenase/ nad +, le complexe p44/ zn 2 + dans tfiih, et enfin les complexes mrp8/ mrp14. L'ensemble des etudes rapportees etablissent les possibilites analytiques - mais aussi les limites - de cette nouvelle spectrometrie de masse, dite supramoleculaire.