Le facteur d'initiation de la traduction IF2 d'escherichia coli : mutants thermosensibles et nouvelles interactions

• Auteur / Autrice : Guilhem Larigauderie
• Direction : Yves Cenatiempo, Hans Uffe Sperling-Petersen
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie
• Date : Soutenance en 2000
• Etablissement(s) : Poitiers

Mots clés

Mots clés contrôlés

Escherichia coli

Résumé

Chez les procaryotes, au moins trois facteurs, if1, if2 et if3 interviennent dans l'initiation de la synthese des proteines. Le plus gros d'entre eux, le facteur d'initiation 2 est le mieux caracterise. Il interagit avec le gtp, le fmet-arnt m e t f et les sous-unites ribosomiques. Le meme gene, infb, code trois formes distinctes in vivo, qui se differencient seulement par leur extremite n-terminale. La premiere partie de ce travail est consacree a l'etude de mutations ponctuelles situees dans le domaine g du facteur d'initiation 2, chez escherichia coli. Trois mutants, obtenus par mutagenese dirigee, imitent le domaine g du facteur d'elongation tu (ef1a) dans les sequences communes aux proteines g. Les deux autres mutants, iq489 et iq490, au depart selectionnes pour leur mutation ssyg dans le gene infb conduisant a l'abolition d'un defaut de secretion, possedent respectivement une substitution et une insertion au niveau du domaine g d'if2. Les experiences ont ete realisees a la fois in vitro, et in vivo en utilisant une souche particuliere, sl598r, dont la copie chromosomique du gene infb est inactivee, suite au remplacement d'une grande partie de ce gene par une sequence permettant la resistance de la souche au chloramphenicol. Etant donne qu'if2 est une proteine essentielle, une copie fonctionnelle du gene infb est apportee en trans grace a l'integration d'un phage lysogene et thermosensible. Toutes les proteines mutees permettent la survie des cellules dans les conditions testees. Cependant, tous les mutants ont une faible activite gtpasique et une croissance ralentie a basse temperature. Les cinq mutations situees dans le domaine g d'if2 sont a l'origine de cette sensibilite au froid. Dans une deuxieme partie, nous etudions une nouvelle interaction entre if2 et un arn particulier, le tmrna. Les experiences tout d'abord realisees in vitro ont mis en evidence une association forte. Elles sont maintenant egalement effectuees in vivo avec la souche sl598r afin de verifier la specificite de l'interaction.