Etude fonctionnelle de la proteine de liaison d'auxine nt-abp1 chez nicotiana tabacum

par Karine David

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de CATHERINE PERROT RECHENMANN.

Soutenue en 2000

à PARIS 11, ORSAY .

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  • Résumé

    Afin d'etudier la proteine abp1, une proteine de liaison d'auxine, des outils ont ete reunis sur un meme materiel, le tabac. 9 anticorps monoclonaux distincts diriges contre la proteine abp1 de tabac (nt-abp1) ont ete obtenus. La caracterisation de l'interaction de ces anticorps avec la proteine nt-abp1 a montre que ces anticorps ont une affinite elevee pour la proteine et reconnaissent des epitopes discontinus, dependants de la conformation de la proteine. De plus tous ces anticorps interferent avec une reponse precoce a l'auxine, demontrant l'implication de l'abp1 dans les premieres etapes de perception de l'auxine au niveau de la membrane plasmique. Dans le but de determiner l'importance de la region c-terminale pour la fonction de la proteine au niveau de la membrane plasmique, nous avons entrepris une approche de mutagenese dirigee des residus conserves de cette region. L'etude de l'interaction des proteines mutees avec les anticorps suggere que les mutations ponctuelles modifient le repliement de la proteine, alterant son activite au niveau de la membrane plasmique. Les anticorps anti-nt-abp1 ont ete utilises pour etudier la fonction de la proteine nt-abp1 in vivo. Nous avons developpe une strategie fondee sur l'utilisation de ces anticorps, dite d'immunisation cellulaire. Le but est d'exprimer dans la cellule des scfv (single chain fragment variable) afin d'agir directement sur la proteine. Les scfv correspondant a 4 anticorps distincts ont ete obtenus. L'etude de leur interaction avec la proteine nt-abp1 a montre que les scfv ont conserve les memes caracteristiques que les anticorps initiaux. Dans le but de perturber la proteine nt-abp1, localisee dans le reticulum endoplasmique et au niveau de la membrane plasmique, les scfv ont ete modifies afin de cibler leur expression au niveau de ces deux sites. Les resultats preliminaires obtenus dans les cellules de tabac en culture suggerent qu'il existe un lien entre la proteine abp1 et la division cellulaire.

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Informations

  • Détails : 150 p.
  • Annexes : 123 ref.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
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