Les recepteurs humains du vip, vpac 1 et vpac 2 : mutagenese dirigee, chimerisme moleculaire et alanine-scanning du vip

par PASCAL NICOLE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de MARC LABURTHE.

Soutenue en 2000

à PARIS 11, ORSAY .

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  • Résumé

    Le peptide intestinal vasoactif (vip) joue un role regulateur important dans tout l'organisme. Le but du travail de recherche presente ici est l'analyse de la relation structure-fonction du vip et de ses recepteurs humains vpac 1 et vpac 2. Les recepteurs vpac appartiennent a une sous-famille originale de la super-famille des recepteurs couples aux proteines g (rcpg), la famille de classe ii. Cette sous-famille se caracterise notamment par une extremite n-terminale extracellulaire tres longue, superieure a 120 acides amines, siege de la fixation du ligand. Les etudes menees au cours de cette these se repartissent en trois parties : 1) etude de la relation structure/activite du vip pour interagir avec les recepteurs vpac 1 et vpac 2 humains. Chaque residu du vip est remplace individuellement par un residu alanine (ala-scan). Les differents peptides obtenus par synthese chimique ont ete testes par inhibition competitive de la liaison de vip radiomarque ( 1 2 5i-vip) aux recepteurs recombinants vpac 1 et vpac 2. Les resultats ont montre que les residus importants pour la liaison du vip se repartissent tout du long de la molecule de vip. Ce travail a permis de developper le premier analogue selectif du recepteur vpac 1 humain : ala 1 1 , 2 2 , 2 8-vip. 2) etude de la relation structure/activite des recepteurs humains vpac 1 et/ou vpac 2. Des techniques de mutagenese dirigee et de transfection transitoire des mutants dans des cellules cos-7 et cho en culture ont permis de mettre en evidence le role de differents residus au niveau des recepteurs vpac 1 et vpac 2 dans la reconnaissance du vip. Les resultats obtenus renforcent l'importance du role des domaines extracellulaires (n-terminal et boucles i et ii) dans la liaison du vip. Ces travaux ont permis, par ailleurs, de developper et de valider un modele 3d du domaine n-terminal du recepteur vpac 1 humain. 3) etude de la difference de selectivite pharmacologique du recepteur vpac 1. Nous avons demontre par chimerisme moleculaire et mutagenese dirigee que la selectivite pharmacologique des recepteurs humains et de rat envers un peptide de la meme famille que le vip, le phi, est portee par trois acides amines non-adjacents de la 1 e r e boucle extracellulaire et du 3 e m e domaine transmembranaire. Ce domaine est different du domaine majeur de reconnaissance du vip, le domaine n-terminal.


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Informations

  • Détails : 200 p.
  • Annexes : 380 ref.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
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