Contribution a l'etude de l'activite de chloration de la myeloperoxydase humaine dans le stress oxydant : modifications du nadph et de la superoxyde dismutase par hoci

par FRANCOISE AUCHERE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de CHANTAL CAPEILLERE BLANDIN.

Soutenue en 2000

à Paris 11 .

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  • Résumé

    La myeloperoxydase (mpo) presente dans les polymorphonucleaires neutrophiles humains joue un role fondamental dans les processus de defense de l'organisme. En effet, parallelement a un cycle classique de peroxydase, elle peut, en presence d'eau oxygenee et de chlorure, produire de l'acide hypochloreux (hoci), espece fortement oxydante impliquee dans la lutte contre l'infection. Depuis quelques annees, de nombreux travaux tendent a impliquer hoci dans le stress oxydant et a preciser l'importance des reactions de chloration de nombreuses biomolecules lors des phenomenes d'inflammation. Nous avons choisi d'etudier les reactions de hoci vis-a-vis de deux anti-oxydants cellulaires, le nadph et la superoxyde dismutase. Au cours de cette etude, nous avons montre que la reaction de hoci, libre ou engendre par le systeme enzymatique, sur le nadph, reducteur present dans la cellule, conduit a la formation d'un metabolite unique different de nadp + et modifie sur le noyau nicotinamide. Afin de valider l'hypothese d'une reaction de chloration, le produit de reaction de hoci sur le nadph a ete purifie par chromatographie liquide haute performance (clhp). Des experiences de spectrometrie de masse par ionisation electrospray et de resonance magnetique nucleaire ont permis d'identifier la structure du metabolite forme comme etant une chlorohydrine : la 5-chloro-6-hydroxy-tetrahydronicotinamide adenine dinucleotide phosphate. En parallele, une etude cinetique approfondie de la reaction du nadph avec le systeme mpo/h 2o 2/chlorure a permis de valider le role du nadph en tant que sonde originale de production de hoci par la myeloperoxydase humaine (biochem. J. 1999. Nov. 1. Vol 343, 603-613). Par ailleurs, nous avons realise une etude de la reaction de hoci sur la superoxyde dismutase (sod), enzyme impliquee dans la dismutation de l'anion superoxyde. Cette etude a mis en evidence des modifications structurales de la proteine, conduisant a une perte de l'activite catalytique de l'enzyme.


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  • Détails : 174 p.
  • Annexes : 252 ref.

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