Cristallogenese du bpti a ph acide : etude des relations entre l'etat d'association des molecules en solution et a l'etat cristallin par diffusion et diffraction des rayons x

par CYRIL HAMIAUX

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de THIERRY PRANGE.

Soutenue en 2000

à PARIS 11, ORSAY .

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  • Résumé

    La cristallisation des proteines est un phenomene de transition de phase liquide/solide encore mal compris, d'une part parce que les proteines sont des objets complexes, comportant plusieurs milliers d'atomes et presentant tres peu de symetrie, et d'autre part, parce qu'il est indispensable de les conserver, meme au sein du cristal, dans un environnement proche de leur environnement physiologique (aqueux pour les proteines solubles). Au cours de notre etude, notre attention s'est portee sur la cristallisation, a ph acide, d'une petite proteine basique, le bpti (bovine pancreatic trypsin inhibitor), en presence de thiocyanate de potassium, de chlorure de sodium et de sulfate d'ammonium. L'evolution de ce systeme au cours de sa transition de phase (depuis la solution jusqu'a l'etat cristallin) a ete suivie et caracterisee au niveau atomique et moleculaire, grace a la complementarite de trois techniques d'analyse : la diffraction des rayons x, la diffusion des rayons x aux petits angles (dxpa) et la filtration sur gel. L'etude cristallographique a permis de caracteriser l'etat final du systeme : les cristaux. Nous avons mis en evidence que les trois formes cristallines differentes obtenues selon les cas, presentent un motif commun sous la forme d'un decamere de bpti. Par la suite, nous avons pu montrer, par des etudes couplees par dxpa et par filtration sur gel, en utilisant les resultats cristallographiques obtenus precedemment, qu'un phenomene d'oligomerisation des molecules avait lieu en solution, avant la nucleation, et que les particules formees n'etaient autres que les decameres observes dans les differentes formes cristallines. Ces resultats suggerent alors un mecanisme a deux etapes pour la cristallisation du bpti : formation puis empilement des decameres. Au terme de cette etude, ce systeme, au comportement inattendu et presentant plusieurs autres caracteristiques interessantes, a vocation a jouer un role de systeme modele pour l'etude de la cristallogenese.

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Informations

  • Détails : 173 p.
  • Annexes : 155 ref.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-014794
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