Analyse du role du surenroulement de l'adn induit par la transcription dans la reactivation du promoteur leu-500 chez salmonella typhimurium

par DRISS ELHANAFI

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de Lionello Bossi.

Soutenue en 2000

à Paris 11 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    La notion que le mecanisme de la transcription peut generer des perturbations topologiques sur l'adn substrat a ete basee sur des etudes ayant comme outil de travail des molecules plasmidiques de petites taille. Dans le present travail, nous avons tester ce modele sur le chromosome bacterien en utilisant un promoteur sensible au surenroulement de l'adn comme sonde fonctionnelle aux changements topologiques. Le promoteur leu-500 chez salmonella typhimurium est un mutant inactif de l'operon leucine qui est reactive lorsque le niveau de surenroulement negatif de l'adn est plus important dans la cellules, typiquement comme dans des souches mutantes pour le gene de la topoisomerase i (topa). L'activation du promoteur leu-500 a ete analysee dans des souches topa, apres introduction dans la region en amont de l'operon leucine, des unites transcriptionnelles inductibles. Certaines de ces insertions inhibaient l'activation de leu-500 lorsqu'elles sont placees dans un interval entre 0,6 a 1,7 en amont de leu-500 suggerant une implication de cette region dans le mecanisme intrinseque de la reactivation de leu-500 par des mutations topa. La transcription sur ces unites peut activer ou inhiber le promoteur leu-500 selon que l'orientation est respectivement divergente ou convergente par rapport a leu-500. Ces resultats sont en accord avec l'idee que le surenroulement de l'adn generee par la transcription peut diffuser sur le chromosome. L'effet inhibiteur a ete observe avec des insertions situees jusqu'a 5 kb et que cette effet est elimine en introduisant un site fort pour la gyrase entre le site de l'insertion et le promoteur leu-500. Nous avons aussi analyse l'implication de la transcription des gene situes naturellement en amont de l'operon leucine, dans la reactivation du promoteur leu-500. L'isolement de plusieurs deletions qui couvrent cette region nous a montre que la transcription a partir des trois genes, qui sont transcrits dans le sens divergent par rapport a leu-500, n'est pas impliquee dans la reactivation de ce dernier. Ces observation sont en contraste avec les resultats des travaux faits sur des constructions plasmidiques. Nous discutons ces resultants sur la base des differences topologiques qui different entre des molecules plasmidiques et le chromosome ainsi que sur le contexte genetique de chaque systeme.


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Informations

  • Détails : 180 p.
  • Annexes : 429 ref.

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  • Cote : TH2014-014680
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