Etude structurale et dynamique de l'etat natif et des etats denatures de la neocarzinostatine par microcalorimetrie differentielle spectroscopies optiques et diffusion de neutrons et rayons x

par DANIELA RUSSO

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de PATRICK CALMETTES.

Soutenue en 2000

à Paris 11 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Une caracterisation structurale et dynamique des etats denatures des proteines est indispensables a la comprehension des mecanismes qui regissent le repliement des proteines. C'est dans ce but qu'une telle etude a ete entreprise en prenant comme modele la proteine globulaire neocarzinostatine dans differentes conditions de denaturation. Elle est constituee de sept feuillets qui forment un motif en tonneau maintenu par deux liaisons bisulfure. Une caracterisation complete des etats natif et denatures, tant du point de vue structural que dynamique, a ete entreprise avec plusieurs techniques susceptibles d'apporter des informations a differents niveaux. Lors des experiences la ncs a ete destabilisee par la temperature et un agent chaotrope, le chlorure de guanidinium (gdmcl). La diffusion des rayons x et des neutrons aux petits angles, nous a permis d'obtenir des informations sur la variation de la compacite de la proteine en fonction de la temperature et de la concentration de gdmcl. Les spectres de diffusion montrent que la ncs perd completement sa structure globulaire au dessus de 80\c ou en presence d'environ 5m de gdmcl. La temperature et la concentration de demi denaturation sont t m = 70\c c m = 3. 5m (dans l'eau lourde), respectivement. Une analyse des spectres de la proteine fortement denaturee, nous a permis d'obtenir des valeurs de la longueur de la chaine et de sa longueur de persistance qui sont compatibles avec celles estimees theoriquement. Des experiences ont aussi ete realisees pour mesurer le rayon de giration a concentration nulle et le second coefficient du viriel de la solution afin d'evaluer les interactions entre les molecules. Une caracterisation complete ete realisee en fonction de la temperature et de la concentration de gdmcl par fluorescence et dichroisme circulaire. Ces deux techniques permettent de mettre en evidence les variations de structure tridimensionnelle locale et de structure secondaire de la proteine, respectivement. Des mesures de microcalorimetrie ont nous permis de montrer que la denaturation thermique de la ncs est completement reversible et de mesurer la variation d'enthalpie pendant la transition. Enfin, la diffusion quasi elastique des neutrons nous a permis d'etudier la dynamique intramoleculaire de la ncs en solution en fonction de la temperature. Les resultats montrent des changements des mouvements internes de la proteines a l'echelle de quelques picosecondes se produisent au cours de la denaturation.


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  • Détails : 243 p.
  • Annexes : 207 ref.

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  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-014586
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