Construction d'une banque de fusions traductionnelles et son utilisation pour l'exploration moleculaire et fonctionnelle du genome de kluyveromyces lactis

par ABDELKARIM JAMALI

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de MONIQUE BOLOTIN FUKUHARA.

Soutenue en 2000

à PARIS 11, ORSAY .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Kluyveromyces lactis est une levure non conventionnelle apparentee a s. Cerevisiae. Elle a ete utilisee pour la production de proteines heterologues d'interet alimentaire et medical grace a son systeme secretoire efficace. Cependant cette levure reste mal connue aux niveaux genetique et moleculaire. Pour contribuer au developpement de k. Lactis comme organisme eucaryote de choix pour la production heterologue, nous avons construit une banque de fusions traductionnelles qui nous a permis de : - generer des etiquettes de genes connues sous le nom d'ests (pour expressed sequenced tags) a partir d'un echantillon aleatoire. L'analyse de ces ests et la comparaison des sequences peptidiques correspondantes avec leurs homologues de s. Cerevisiae nous a permis de conclure que la moyenne d'identite des sequences peptidiques de k. Lactis et de s. Cerevisiae est importante (57% avec une deviation standard de 17%). Cette information supplementaire conforte la parente phylogenetique entre k. Lactis et s. Cerevisiae determinee a partir des sequences d'adn ribosomique. De plus la classification des sequences peptidiques deduites de nos ests en categories fonctionnelles (determinees pour s. Cerevisiae) a permis de conclure que les diffrentes classes fonctionnelles sont conservees entre k. Lactis et s. Cerevisiae. - montrer que la selection genetique de toutes les fusions exprimees de la banque ne peut pas se faire si on transforme une souche de k. Lactis incapable de croitre sur lactose (deletee pour le gene lac4 specifiant la -galactosidase de k. Lactis) avec la banque de fusions avec le gene lacz de e. Coli comme rapporteur. L'etalement etant fait sur un milieu minimum contenant le lactose comme seule source de carbone. Par contre, cette selection permet de selectionner des genes fortement exprimes susceptibles d'avoir des promoteurs forts qui pourraient etre utilises pour la production heterologue. - monter que les systemes de defense de k. Lactis contre les stress thermique et oxydatif sont partiellement chevauchants avec s. Cerevisiae (certains genes sont regules de la meme maniere chez les deux organismes), alors que d'autres genes sont specifiquement induits chez l'un ou l'autre des deux organismes. Nous avons relie ces differences des reponses aux stress aux metabolismes energetiques differents de k. Lactis et s. Cerevisiae. Cette etude des reponses aux stress chez k. Lactis met a disposition des biotechnologues des genes qui possederaient des promoteurs regules interessants pour la production des differentes proteines hetrologues.


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  • Détails : 230 p.
  • Annexes : 287 ref.

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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-014544
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