Phosphorylation des proteines chez bacillus subtilis

par DELPHINE DELATTRE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées. Sciences médicales

Sous la direction de Simone Laurent.

Soutenue en 2000

à Paris 7 .

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  • Résumé

    Les etudes concernant les phenomenes de phosphorylation des proteines sur les residus ser/thr ou tyr ont montre l'importance de ce mode de regulation chez les eucaryotes. L'objectif de cette these etait d'etudier la phosphorylation de proteines sur ces residus chez bacillus subtilis. Tout d'abord, une centaine de proteines phosphorylees ont ete detectees apres marquage in vivo et separation par electrophorese 2-d ( 3 2p). Certaines d'entre elles ont ete identifiees et les genes correspondants clones. Les proteines, fusionnees a un histag, ont ete surproduites et purifiees. Parmi elles, l'alkyl-hydroperoxyde-reductase, ahpc, impliquee dans la reponse au stress oxydant, a attire notre attention. Cette proteine fait partie des peroxyredoxines a 2 cysteines, son activite enzymatique requiert la formation de ponts disulfures intermoleculaires. Nous montrons ici pour la premiere fois que cette proteine est phosphorylee in vivo. En effet, le spot marque est reconnu par les anticorps anti-ahpc et est absent de la souche portant le gene interrompu (ahpc :: tn10). La proteine 6his-ahpc est phosphorylee in vitro en presence d'extraits proteiques de b. Subtilis et a ensuite ete purifiee. Une analyse de la stabilite de la liaison phosphate a differents agents a permis d'exclure une phosphorylation sur un residu ser, thr, arg, his, lys, asp ou glu. Nos resultats indiquent que les cysteines jouent un role important dans la phosphorylation de ahpc. En effet, la liaison phosphate est labile en presence d'agents reducteurs. Chez b. Subtilis, ahpc comporte 3 cysteines, c37, c47 et c166. L'analyse par phosphorylation in vitro des proteines mutees montre que la cysteine c37 n'intervient pas dans la phosphorylation de 6his-ahpc. Par contre, c47


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Informations

  • Détails : 251 p.
  • Annexes : 247 ref.

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • Accessible pour le PEB
  • Cote : TS2000
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