Mecanisme d'import nucleaire du genome hiv applications a la vectorologie et au transfert de gene

par VERONIQUE ZENNOU

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de LUC MONTAGNIER.

Soutenue en 2000

à Paris 6 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    L'initiation et la terminaison centrale de la synthese du brin plus, unique a la retrotranscription des lentivirus, conduit a la formation d'une structure a trois brins de 99 nucleotides de long (l'adn flap central) au milieu de l'adn lineaire non integre. Des mutations dans le cppt et le cts, les sequences cis-actives impliquees dans la formation de l'adn flap central, altere profondement l'infectivite du virus. L'adn retrotranscrit des virus mutants ne possedant pas d'adn flap central est bloque a un stade lineaire, au voisinage de la membrane nucleaire, au lieu d'entrer dans le noyau et de se circulariser ou de s'integrer. L'adn lineaire des mutants du flap garde sa capacite a s'integrer in vitro. Nous proposons un mecanisme d'import nucleaire de l'adn genomique du hiv dans lequel la strategie de retrotranscription des lentivirus creee un adn flap central qui est implique dans la maturation du complexe de retrotranscription en complexe de pre-integration et dans la translocation de l'adn viral a travers le pore nucleaire. L'import nucleaire actif et donc la replication independante de la mitose fait des lentivirus de bon candidats pour les applications de transfert de gene. Les vecteurs lentiviraux doivent inclure les determinants de l'import nucleaire pour realiser une transduction efficace de cellules cibles non mitotiques. Les vecteurs retroviraux classiques dits de remplacement ne sont pas optimaux pour cette optique. Nous avons donc insere l'adn flap central dans un systeme de vecteur derive du hiv. Nous avons observe une forte augmentation du titre des vecteurs dans differents types de cellules, in vitro comme dans les cellules hela arretees ou non, les cellules primaires de moelle epiniere ou les cellules souches (ec et hsc), aussi bien qu'in vivo par injection directe dans le cerveau de rat. Nous correlons cette augmentation de la transduction de gene avec une complementation, a un niveau sauvage, de l'import nucleaire des vecteurs depourvus d'adn flap central.


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Informations

  • Détails : 200 p.
  • Annexes : 149 ref.

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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 2000
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