Initiation de la transcription de l'adn ribosomique chez s. Cerevisiae : role de a43, sous unite specifique de l'adn polymerase i, et du facteur rrn3

par GERALD PEYROCHE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de MICHEL RIVA.

Soutenue en 2000

à Paris 6 .

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  • Résumé

    Chez tous les eucaryotes, le gene du precurseur des arn ribosomiques (adnr) est transcrit par l'arn polymerase i (pol i). Chez s. Cerevisiae, l'initiation de la transcription de l'adnr necessite la fixation sur son promoteur de deux complexes multimeriques (core factor et upstream activating factor respectivement). L'initiation de la transcription necessite egalement l'association de la pol i avec le facteur monomerique rrn3. Neanmoins, la fonction exacte de rrn3, ainsi que le mecanisme de recrutement de l'enzyme, etaient inconnus. Dans ce travail, nous demontrons que la sous-unite specifique a43 est essentielle pour l'interaction de rrn3 avec la pol i : a43 et rrn3 forment un complexe stable lorsqu'elles sont co-exprimees dans e. Coli, des mutations dans a43 entrainent une dissociation du complexe pol i-rrn3, le surdosage de rrn3 supprime in vivo le phenotype resultant de ces mutations, et les alleles mutants rpa43-6 et rrn3-8 presentent une letalite synthetique. De plus, des etudes d'immunomicroscopie electronique indiquent que a43 et rrn3 sont co-localisees sur l'enveloppe tridimensionnelle de la pol i. Nous avons par ailleurs obtenu des donnees suggerant que rrn3 permet le recrutement de la pol i par le core-factor : rrn3 est essentiel au recrutement de la pol i in vivo, et rrn3 interagit avec un domaine essentiel de rrn6, une des trois sous-unites du core-factor. L'existence d'orthologues de a43 et rrn3 chez les mammiferes suggere que les mecanismes permettant le recrutement de la pol i sont conserves au cours de l'evolution. Nos etudes suggerent egalement que a43 pourrait etre importante pour la stabilisation de abc23, une sous-unite du noyau enzymatique : abc23 n'est plus associee a la pol i lorsque l'enzyme est purifie a partir d'une souche dans laquelle a43 est absente, a43 et abc23 forment un complexe stable lorsqu'elles sont co-exprimees dans e. Coli et sont co-localisees sur l'enveloppe tridimensionnelle de la pol i. Ces donnees suggerent que a43 occupe une position cle au sein de la pol i, a l'interface entre le cur catalytique de l'enzyme et la machinerie des facteurs generaux de la transcription. Elles mettent en evidence l'importance de la connexion a43-rrn3-rrn6 pour le recrutement de la pol i sur le promoteur de l'adnr.


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Informations

  • Détails : 212 p.
  • Annexes : 260 ref.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 2000
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