Separation et caracterisation des fragments d'heparine par electrophorese capillaire et spectrometrie de masse

par SEVERINE DUTEIL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de PIERRE GAREIL.

Soutenue en 2000

à Paris 6 .

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  • Résumé

    L'heparine est constituee de polysaccharides sulfates d'origine naturelle, extraits du mucus intestinal porcin, bovin ou ovin. Depuis 80 ans, elle est reconnue pour ses proprietes anticoagulantes et antithrombotiques. Elle presente une polydispersite et heterogeneite importante. Malgre le tres grand nombre d'etudes qu'elle a suscite, sa structure demeure incompletement elucidee. L'electrophorese capillaire (ce) s'avere tres competitive par rapport aux methodes chromatographiques d'exclusion sterique ou echange d'ions, car elle permet des separations performantes d'oligosaccharides selon la charge et la taille dans un assez large domaine de masses moleculaires et apporte la possibilite d'inverser ou modifier l'ordre de detection. La spectrometrie de masse (ms), par ailleurs, permet maintenant l'identification de tels composes polycharges grace au developpement des sources de type electronebulisation, mais n'est pas directement applicable aux fractions hepariniques en raison de leur heterogeneite. Le present travail montre le potentiel du couplage de l'electrophorese capillaire et de la spectrometrie de masse (ce-ms) applique a l'elucidation de la structure des oligosaccharides de l'heparine. Au cours de cette etude, les contraintes liees au couplage ont ete surmontees et les parametres optimises. Les diverses combinaisons d'electrophoreses en polarite positive ou negative et de ms en mode d'ionisation positive ou negative ont ete etudiees. Les methodes developpees ont ete validees avec un melange de 8 disaccharides standard de l'heparine et appliquees a des melanges complexes d'oligosaccharides provenant de la degradation enzymatique de l'heparine ou d'heparines de basses masses moleculaires. Pour ces etudes, differents analyseurs ont ete utilises (quadripole, trappe ionique et temps de vol). Les resultats tres encourageants obtenus permettent de considerer que la ce-ms deviendra prochainement une methode de choix pour la caracterisation de ces fractions hepariniques.


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Informations

  • Détails : 208 p.
  • Annexes : 235 ref.

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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 2000
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