Implication de rab3 dans la sensibilite au calcium de l'exocytose et caracterisation de la proteine rab3-gap

par AUDE CLABECQ

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de François Darchen.

Soutenue en 2000

à Paris 6 .

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  • Résumé

    La proteine g monomerique rab3 est une des proteines impliquees dans le processus d'exocytose. L'injection de rab3-q80l, un mutant sans activite gtpasique, dans des neurones identifiees du ganglion buccal d'aplysie, diminue l'amplitude des reponses post-synaptiques. L'injection sequentielle de rab3-q80l et d'egta montre que la diminution de la concentration intracellulaire de calcium potentialise l'effet inhibiteur de rab3-q80l. A l'inverse, la stimulation repetee des neurones, qui augmente l'entree de calcium dans les terminaisons nerveuses, leve l'inhibition exercee par rab3:gtp. Nous avons ainsi montre que rab3 est impliquee dans la sensibilite au calcium de la reponse secretrice. Nous avons caracterise la proteine rab3-gap qui stimule l'hydrolyse du gtp par rab3. L'affinite de rab3-gap pour rab3, en solution, semble faible puisque le k m et le k d, determines dans ces conditions, sont de 75m. L'affinite de rab3-gap est plus forte (15m) pour l'analogue de l'etat de transition, rab3 : gdp : alf x. Le k c a t de rab3-gap (1 sec 1) est compatible avec les valeurs mesurees pour d'autres gap. L'activite de rab3-gap n'est pas modulee ni par le calcium ni par le complexe calcium/calmoduline. La rabphiline, un effecteur de rab3, est capable d'inhiber l'activite de rab3-gap, suggerant que ces deux proteines interagissent avec le meme domaine de rab3. Ceci a ete confirme par le fait qu'une mutation dans le domaine effectuer de rab3 (rab3-v55e) entraine une perte d'interaction avec rab3-gap. Nous avons identifie un residu arginine essentiel a l'activite de rab3-gap. En effet, le mutant rab3-gap-r728a est incapable de stimuler l'hydrolyse du gtp alors qu'il peut toujours interagir avec rab3. La surexpression de rab3-gap ou de rab3-gap-r728a dans les cellules pc12 ne modifie ni l'amplitude ni la sensibilite au calcium des reponses secretrices. D'autres outils devront etre developpes pour modifier l'activite de rab3-gap et determiner son role dans la modulation de l'exocytose.


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  • Détails : 268 p.
  • Annexes : 380 ref.

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  • Cote : PMC RT P6 2000
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