Optimisation du transfert de genes aux myocytes ventriculaires adultes et effets physiologiques du transfert de serca

par NATHALIE CHOSSAT

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de Jean-Jacques Mercadier.

Soutenue en 2000

à Paris 5 .

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  • Résumé

    Nous avons montre que l'injection d'un adenovirus dans les arteres coronaires permettait un transfert de gene aux myocytes cardiaques homogene et efficace lorsque la permeabilite endotheliale etait augmentee soit par un agent permeabilisant, l'histamine, ou l'absence de calcium. Nous avons montre que l'interruption de la circulation pendant une courte periode au moment de l'injection des adenovirus etait egalement un facteur determinant pour permettre aux virus de diffuser a travers la barriere endotheliale. La mise au point d'un modele cellulaire de co-culture de cellules endotheliales et de cardiomyocytes, nous a permis d'optimiser les modalites de transfert adenoviral aux cellules musculaires en testant l'effet d'agents pharmacologiques sur la permeabilite endotheliale. Parallelement, nous avons etudie les consequences du transfert adenoviral de la ca 2 +-atpase du reticulum sarcoplasmique (serca), diminuee lors de l'insuffisance cardiaque, sur les mouvements du calcium intracellulaire dans les myocytes ventriculaires de rat adultes. Nous avons montre que la proteine exogene serca1 est fonctionnelle, que son expression entraine une augmentation des proteines totales serca, une acceleration du pompage du ca 2 + associee a une acceleration de la vitesse de relaxation de la cellule. Cependant, la surexpression de serca1 entraine des modifications comparables a elles obtenues suite a une stimulation physiologique des cardiomyocytes. Nous avons egalement developpe une technique de transfert rapide de proteines en fusionnant des cellules facilement transfectables avec le gene d'interet et les myocytes cardiaques. Nous avons etudier les effets du transfert de serca1, une heure seulement apres la fusion et le jour meme de l'isolement des myocytes. Nous avons observe que la proteine serca est correctement adressee dans le myocyte cardiaque et qu'elle modifie significativement la transitoire calcique des myocytes ventriculaires.


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Informations

  • Détails : 202 p.
  • Annexes : 445 ref.

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