Peptides anioniques permeabilisants : synthese et application au transfert d'oligonucleotides et de genes

par ISABELLE FREULON

Thèse de doctorat en Sciences médicales

Sous la direction de ROGER MAYER.

Soutenue en 2000

à Orléans .

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  • Résumé

    Les oligonucleotides et les genes sont potentiellement des agents therapeutiques puissants, mais leur sequestration dans des compartiments vesiculaires, apres endocytose, limite leur efficacite. Le virus de la grippe, qui entre dans les cellules hotes par endocytose, possede a sa surface une glycoproteine trimerique, l'hemagglutinine qui, par suite d'un changement conformationnel dans la lumiere acide des endosomes, expose un segment peptidique, appele peptide de fusion, implique dans la fusion entre l'enveloppe virale et la membrane endosomique, qui permet de liberer le genome viral dans le cytosol de la cellule infectee. Sur ces bases, nous avons synthetise sur support solide divers analogues, sous forme soit de monomeres (e5ca et e5wyg), soit de dimeres par l'intermediaire d'un residu lysine (e5wygg) 2ka et (e5wyggaa) 2ka. Chaque peptide a ete caracterise par spectrometrie de masse et par plusieurs methodes physico-chimiques. Par dichroisme circulaire, nous avons montre que les peptides adoptent une conformation en helice en milieu acide (ph 6). Nous avons montre par microscopie confocale que seuls les peptides monomeriques et plus particulierement e5wyg destabilise en moins de 30 min les membranes plasmiques et permet l'entree des oligonucleotides fluorescents dans le cytosol puis dans le noyau de different types de cellules en culture, lorsque le milieu extracellulaire est acidifie entre ph 5,7 a 6,2. Lorsque ces peptides sont utilises pour transferer des genes dans des cellules par glycofection< t m>, une methode utilisant des complexes polylysine glycosylee/adn plasmidique reconnus specifiquement par des lectines cellulaires, l'efficacite de transfection est augmentee d'un facteur 100 a 1000 selon la peptide et le type cellulaire utilises. Dans tous les cas, le dimere (e5wyggaa) 2ka est toujours le plus efficace : son efficacite est 10 a 40 fois superieur a celle du dimere court (e5wygg) 2ka et 3 a 7 fois superieur a celle du monomere e5wyg. En conclusion, des peptides anioniques permeabilisants, analogues du peptide de fusion du virus de la grippe, permettent de favoriser l'entree d'une large gamme d'acides nucleiques, cibles ou non, dans le cytosol et le noyau et pour etudier leur activite comme modulateurs dans le but de preciser leur potentiel en tant qu'agents therapeutiques.


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Informations

  • Détails : 220 p.
  • Annexes : 269 ref.

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  • Bibliothèque : Université d'Orléans. Service commun de la documentation.Section Sciences.
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