Production des puroindolines-a et -b de ble par une levure methylotrophe : pichia pastoris

par NICOLAS ISSALY

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de GUY MOULIN.

Soutenue en 2000

à l'ENSA MONTPELLIER .

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  • Résumé

    Les puroindolines sont de petites proteines d'environ 13 kda qui ont ete isolees de l'albumen de ble tendre par la methode de partage de phase dans le triton x-114. Les puroindolines possedent des proprietes tensioactives exceptionnelles qui offrent la possibilite de developper de nouveaux surfactants naturels utilisables pour des applications en agro-alimentaire. La levure methylotrophe pichia pastoris a ete utilisee pour produire en culture en fermenteur les puroindolines-a et -b recombinantes. En culture fed-batch, la production de rpin-a diminue apres 24 h d'induction par le methanol. La majorite de rpin-a n'est pas soluble dans le milieu de culture et reste liee aux cellules. Un protocole de partage de phase dans le tx-114 adapte aux levures a ete mis au point afin de solubiliser la fraction rpin-a liee aux cellules. L'influence de plusieurs parametres physico-chimiques sur la production de rpin-a, tel que la temperature, le ph, la vitesse specifique de croissance et l'ajout de tx-114, a ete testee en cultures continues. La production de rpin-a a ete amelioree lorsque les cultures continues ont ete realisees a 29\c, a ph 5 avec un faible taux de dilution d = 0. 025 h 1. L'ajout de 0. 01% de tx-114 dans le milieu de culture a permis d'inverser le ratio rpin-a soluble / rpin-a liee aux cellules. Finalement, la production de rpin-a a ete multipliee par 10 et 14 mg. L 1, dont 80% sous forme soluble rpin-a ont ete produits lorsque les conditions optimales ont ete definies.

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Informations

  • Détails : 199 p.
  • Annexes : 189 ref.

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