Expression genique de la cellule es a la souris : deux exemples de piegeage de genes du developpement

par STEPHANIE BESSONE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de François Cuzin.

Soutenue en 2000

à Nice .


  • Résumé

    Des modeles cellulaires de lignees multipotentes capables de se differencier in vitro, telles que les cellules es, ont facilite l'etude du developpement chez les mammiferes. Le piegeage de genes permet d'etudier l'expression d'un gene, d'une part dans des cellules es avant et apres differenciation in vitro, et d'autre part in vivo dans l'embryon et la souris adulte. Il offre de plus la possibilite d'identifier le gene piege et de l'interrompre. Dans une premier travail, j'ai isole, inactive et etudie un gene dont l'expression etait modulee par l'acide retinoique. Il s'agit du gene de la serine threonine kinase emk qui phosphoryle les proteines associees aux microtubules telles que map2, map4, tau et les phosphatases de type cdc25c. Le patron d'expression de ce gene au cours du developpement est complexe. La mutation affecte la croissance et la reproduction des animaux. Ce phenotype est associe a une diminution de la concentration plasmatique d'igf1 et a une diminution chez les femelles de la production de prolactine par l'hypophyse. L'inactivation des deux genes connus homologues a emk1 : emk2 et emk3 permettra de poursuivre l'etude de la fonction de ces genes in vivo en s'affranchissant de redondances fonctionnelles eventuelles. Dans une deuxieme approche, j'ai etudie un gene exprime dans les cardiomyocytes differencies in vitro a partir des cellules es. Il s'agit du gene zn-15 qui code pour un facteur de transcription a seize doigts de zinc et qui chez le rat agit conjointement avec le facteur de transcription pit1 sur la boite z du promoteur du gene de l'hormone de croissance. Chez l'adulte l'expression du gene zn-15 se retrouve dans de nombreux tissus. Chez l'embryon il s'agit d'une expression preferentiellement mesodermique. L'insertion du vecteur de piegeage de genes n'a pas abouti a l'inactivation du gene zn-15. L'etude de la structure de ce gene permettra de l'inactiver par recombinaison homologue.


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